生物转化法制备天然香料丙位癸内酯的初步研究(5)
2.1.3 实验主要仪器
表2.1.3 主要仪器与设备一览表
仪器/设备名称 生产厂家
TZ一ZAH台式恒温振荡培养箱
北京沃德创意技贸有限公司
TG328A电光分析天平
上海天平仪器厂
101一3型干燥箱
上海市实验仪器厂
LDS一2电动离心机
北京市医用离心机厂
WIGGENS 涡旋混匀器
(TM-1/2)
北京桑翌实验仪器研究所
微孔滤膜 上海密粒膜分离技术有限公司
HS3120超声波清洗仪 美国Hamiton公司
GH801-2型超净工作台 天津净化设备厂
Agilent 7890A气相色谱仪 安捷伦科技有限公司
2.1.4培养基
筛选菌种培养基
液体培养基配方(g／L)：葡萄糖3%，蓖麻油5%，吐温-80 0.4%，MgSO4 0.3%， NaCl 0.2%，Na2HPO4 0.12%，KH2PO4 0.1%
装液量50ml,pH值自然，121℃灭菌20min。
单因素实验培养基
液体培养基配方(g／L)：葡萄糖1%，蓖麻油8%，玉米浆 5%，吐温-80 0.4%，MgSO4 0.3%，NaCl 0.2%，Na2HPO4 0.12%，KH2PO4 0.1%
装液量50ml,pH值自然，121℃灭菌20min。
2.2 实验方法
2.2.1 丙位癸内酯转化生产工艺
生物转化法
天然的羟基脂肪酸，比如存在于蓖麻油中的蓖麻醇酸(12-羟基-9-十八碳烯酸)，在微生物转化过程中，先经过β-酸化，使链长缩短．再转化成γ- 癸内酯。本实验采用生物转化法合成γ- 癸内酯，以蓖麻油为原材料，通过酵母菌种发酵过程中的生物转化合成目的产物。
β-酸化 还原 环化
↓ ↓ ↓
蓖麻油酸→6-羟基-3-十二碳烯酸→6-羟基-十二烷酸→4-羟基癸烷酸→ γ- 癸内酯
酵母生物转化蓖麻油合成γ- 癸内酯原理［34］
2.2.2 菌种筛选
摇瓶培养(接种量0.1%)
每种干酵母粉称取0.5g，接入50ml发酵培养基/250ml三角瓶中，28℃摇床过夜培养48h，摇床转速 220r/min。
2.2.3 发酵培养基的优化
采用单因素试验,考察蓖麻油浓度，葡萄糖浓度，玉米浆浓度，表面活性剂等，测定各个不同因素对菌种生产γ- 癸内酯所产生的影响，再采用正交试验进一步确定各成分的最佳加入量，并考察各因素对发酵结果的影响显著性为进一步的研究打下基础。
1)蓖麻油浓度
考察1%，2%，3%，4%，对于转化γ- 癸内酯的产量的影响
2)葡萄糖浓度
考察0，0.1%，0.5%，1%，对于转化γ- 癸内酯的产量的影响
3)玉米浆浓度
考察2%，4%，6%，8%，对于转化γ- 癸内酯的产量的影响
4)表面活性剂
考察添加量均为4g/L，不同品种的表面活性剂对于转化γ- 癸内酯的产量的影响
5）正交优化实验
水平 A:葡萄糖（g） B蓖麻油（g） C吐温-80（g） D 温度（℃）
1 0 0.5 0.1 25
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