产生抗真菌活性物质的植物内生真菌的分离纯化及鉴定(2)
2.3.1 268号菌青霉抑制梯度实验结果 15
2.3.2 268号菌菌丝及产孢结构拍照 17
2.3.3 268号菌菌种鉴定 17
3 讨论 17
4 致谢 18
参考文献 19引言
植物中大量存在着内生真菌，主要分布在植物的叶片、茎、叶鞘等部位，内生真菌由于它的内生性以及多样性，所以目前尚未被完全研究[2]。从已有的研究可以发现，约有30%的植物内生真菌可以产生抑菌作用的生物活性物质[3]。这些生物活性物质不仅对植物病原体起抑制作用,还对一些细菌、真菌以及一些原生生物起抑制作用。而且内生真菌容易培养、繁殖速度极快、产量比较高、培养条件容易控制、生产成本较低、不受季节等自然环境的影响等，使从植物内生真菌代谢产物中筛选抗生素类物质成为研究新型抗生素的一种重要来源。
1993年strobel等从短叶红豆杉中分离出安德氏紫杉霉，并发现其可以作为抗癌药物的来源[4]。之后，从植物中分离产生生物活性物质的内生真菌的实验便成为了一种热潮。
如今，国外的内生真菌分离实验有很大的进展。Strobel等从雷公藤中分离到的可以产生新型环肽抗生素的内生真菌Cryptosporiopsis cf.quercina，既可以有效抑制部分植物致病菌，又可以有效抑制部分人类病原真菌[5]。Pelaez等从刺柏中分离得到的生物活性物质Hormonema是一种新的三萜糖苷,可以杀死假丝酵母、念珠菌和曲霉[6]。Wagenaar等从薄荷中分离到的拟茎点霉属dicerandrols内生真菌,是一种新抗生素[7]。
不仅国外的内生真菌分离实验取得了很大的成功，国内的内生真菌分离实验也获得了优异的成果。李桂玲等从三尖杉、南方红豆杉和香极中分离出的拟青霉属(Paecilomyces sp.)、镰刀菌属(Fusarium.sp.)等内生真菌都能抑制一种或多种植物病原真菌[8]。曾松荣等从虎杖的根状茎中分离出的属于曲霉属、青霉属、无孢菌群的三种内生真菌经检测具有很好的抗菌活性[9]。邹文欣等从黄花篙和蒙古篙中分离到的刺盘孢霉，它可以产生三种具有抗菌活性的次生代谢产物，可以抑制枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、八叠球菌[10]。红树中的内生真菌No.1403对酵母菌和霉菌都具有很好的抑制作用[11]。
总之，在内生真菌这个层面来说,每一种植物都可以说是一个丰富的资源库,从中分离到的内生真菌，除了可以丰富真菌的分类单元外,还能够从其次生代谢产物中筛选出更多有科研意义的新的活性物质[12]。鉴于大量植物内生真菌都具有真菌抑制活性，所以利用内生真菌的分离纯化实验筛选出具有真菌抑制作用的内生真菌受到广大学者的青睐，分离后得到的内生真菌可以用于新的抗生素的研发，可以抑制霉腐微生物，在医药、生物农药、育种等领域应用前景广阔，所以具有一定的科研以及现实意义[13]。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 样品采集
我们2014年10月1号~8号在连云港、淮安、常州等地进行样品采集工作，采集的植物包括小蜡树、络石、椴树、山楂、小叶女贞、红叶李、刺槐、倒槐、冬青、桂花、橘子、腊梅、梨树、玫瑰、木瓜、南京椴、枇杷树、青檀、黄杨、杏子树、榛子、栀子花、毛竹、樱花、棣棠、银杏、金银木、石榴、蔷薇。