三七中总皂甙的提取及其抗氧化性研究(2)
五加科植物三七是我国的传统珍贵药材，以根入药。三七的活性成分是三七总皂甙，它对心脑血管系统有强心的作用，还有扩张冠状动脉、增加冠状血流量、抗血栓形成、抗动脉粥样硬化、降低血粘度、降低血小板表面活性等作用；对大脑的神经细胞凋亡有独特的抑制作用。三七总皂甙是一种混合物, 含有人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1, 三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6 等20 多种皂甙成分[1]。
现在已经报道了很多三七总皂甙的提取工艺，传统的提取工艺主要有渗漉法和乙醇加热回流的方法[2-4]。随着科学技术的不断发展，许多其他领域的技术也开始应用到三七的提取当中，如酶解法、超声波技术、微波技术、罐组逆流提取技术、大孔树脂吸附技术等[5-6]。超声波技术具有作用时间短、破碎效果显著的特点，而酶解法可以有效的破碎细胞壁，使细胞内的有效物质充分析出，大大提高提取的效果[7-8]。
为了提高三七总皂甙的提取率，缩短提取时间，降低生产成本，本文以酶解法结合超声波法提取三七总皂甙，以期为三七总皂甙的生产提供一种新的方法，也为其工业生产提供一定的理论基础。同时也研究了三七总皂甙的体外抗氧化性，以期为它的临床应用提供一些重要的基础数据。
1材料与方法
1.1材料与试剂
三七：市售。
人参皂苷Rg1标准品、纤文素酶（50000 U/g）、5%香草醛-冰乙酸溶液、0.05 mol/L pH7.0的磷酸盐缓冲液（PBS）、无水乙醇、高氯酸、40 mmol/L邻苯三酚、FRAP溶液（10 mmol/L TPTZ工作液：20 mmol/L氯化铁溶液:0.3 mol/L醋酸钠缓冲液=1:1:10）
1.2主要仪器设备
FW高速粉碎机 北京科伟永兴仪器有限公司
AL205电子天平 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司
HH-S6恒温水浴锅 河南省巩义市予华仪器有限公司
KQ2200型超声波清洗器 江苏昆山市超声仪器有限公司
UV-5100型紫外分光光度计 上海元析仪器有限公司
HC-3019高速离心机 安徽中科中佳科学仪器有限公司
1.3方法
1.3.1三七总皂甙的提取方法
取一定质量的三七，经粉碎后，用80目筛过滤，得到三七粗粉。称取1 g的三七粗粉，加入到一定量的纤文素酶与PBS的缓冲溶液中，而后加入乙醇溶剂进行提取，通过超声波破碎30 min后于3000 r/min离心分离，上清液即为三七总皂甙的提取液。
1.3.2三七总皂甙的测定
1.3.2.1标准曲线的绘制
称取人参皂苷Rg1标准品6.0 mg，加入甲醇溶解，定容至10 mL，得到标准品溶液。精密吸取标准品溶液0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL，分别置于试管中，依次加入5%香草醛-冰乙酸溶液0.3 mL、高氯酸0.7 mL，混匀后在60℃水浴中加热15 min，然后冷却到室温，随后加入冰乙酸5.0 mL，摇匀，空白参比用不加标准品的试剂，在波长为550 nm处测定吸光度值。横坐标为吸光度，纵坐标为提取液的浓度，绘制标准曲线，最后求出回归方程为Y=0.03865x-0.00015(R2=0.9988)。
1.3.2.2样品的测定
取2 mL三七总皂甙的提取液，按照标准曲线的测定方法测定吸光度值，再根据回归方程计算出三七总皂甙的提取率。
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