与番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N互作的寄主因子筛选(3)
10×TE：0.1 M Tris-HCl，10 mM EDTA，pH=7.5
10×LiAc：1 M LiAc， 用稀释的醋酸调pH=7.5
1.1×TE/LiAc（10 mL）：1.1 mL 10×TE溶液，1.1 mL 10×LiAc溶液，7.8 mL ddH2O
PEG/LiAc（10mL）：8 mL 50% PEG 4000，1 mL 10×TE溶液，1 mL10×LiAc溶液
1．2 方法
1．2．1 质粒的提取
（1）用2 mL离心管取1-5 mL在LB培养基中培养过夜的载体pGBKT7的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12000 rpm离心2 min，弃尽上清，在纸巾上轻扣几下；
（2）加入250 µL已加Rnase A的Buffer I，涡旋震荡悬浮细菌沉淀，如果沉淀过紧可用1 mL吸头吹打数次，直至悬浮均匀，不应留有小的菌块；
（3）加入250 µL的Buffer II，温和并充分地上下翻转混合4-6次，使菌体充分裂解，直至形成澄清透亮的溶液。此步骤不宜超过5 min；
（4）加入350 µL的Buffer III，温和并充分地上下翻转混合6-8次，形成紧实的沉淀，12000 rpm离心10 min；
（5）吸取步骤（4）中的离心上清并转移到DNA制备管（置于2 mL离心管）中，12000 rpm离心1 min，（回到一次）弃滤液；
（6）将制备管置回离心管，加500 L wash I，12000 rpm离心30 s，（回到一次）弃去滤液；
（7）将制备管置回离心管，加700 L wash II，12000 rpm离心30 s，弃去滤液；以同样的方法再加700 L wash II洗涤一次，12000 rpm离心30 s，弃去滤液；
（8）将制备管置回2 mL离心管中，12000 rpm离心3 min；
（9）将制备管置于干净的1.5 mL离心管中，在DNA制备膜正中央加60-80 L Eluent或去离子水（后续实验用于DNA测序请使用自备去离子水洗脱），室温静置1-2 min。12000 rpm离心1 min。弃纯化柱，洗脱的DNA保存于-20℃备用。