早期灌喂母源粪菌对新生仔猪肠道菌群发育的影响(2)
1.2.5数据统计5
2结果与分析5
2.1不同处理条件下新生仔猪粪样微生物多样性的变化情况 5
2.2早期灌喂母源粪菌对新生仔猪粪样微生物区系（门、属水平）结构的影响7
3讨论9
4结论9
致谢9
参考文献10
早期灌喂母源粪菌对新生仔猪肠道菌群发育的影响
肠道是动物机体与外界环境接触最为密切的组织之一，也是机体最大的免疫器官[1]，同时肠道微生物生态系统是哺乳动物体内最复杂和最大的微生态系统，肠道菌群种类多达1000余种，细菌总数多达100万亿，是宿主细胞数量的10倍[2]，其中大多数是正常菌群，这些胃肠道正常菌群在文护动物机体健康，提高营养物质利用等方面起到了很大的作用。不仅如此，研究发现肠道菌群与代谢疾病、免疫类疾病、胃肠道类疾病甚至精神类疾病相关联[3]。
动物胃肠道菌群对其宿主的健康及生长发育有很大影响，保持胃肠道微生物菌群的平衡是文持宿主动物健康状况以及发挥其生产性能的必须条件。动物胃肠道菌群的作用机理及人为调控动物胃肠道菌群平衡以文持动物健康、促进动物生产，一直是国际上的研究热点。研究表明，动物出生前胃肠道中是无菌的，但是出生后3-4 h，肠道内开始检测出细菌[4]，新生动物的胃肠道菌系由富含母体微生物的环境中获得。随着微生物的不断侵入，新生动物在其胃肠道内迅速形成一个极其庞大的微生物群落，一般来说，需氧菌最先定植，兼性厌氧菌其次定植，专性厌氧菌最后定植。Pluske 等(2003)[5]认为，乳酸杆菌和链球菌为哺乳期新生仔猪胃肠道内的优势菌群。而在断奶仔猪中，由于日粮组成成分的变化，加上断奶产生的应激，会使得仔猪胃肠道的内环境发生变化，微生物定植的位点及数量也会随之变化。微生物必须要能够耐受各种抗菌物质及各种逆境，还要能够在动物胃肠道内正常生长繁殖，才能在胃肠道内定植。
近年来，粪菌移植（Fecal microbiota transplantation，FMT）作为一种历史悠久且可以重建肠道菌群的疗法重新被临床所关注。粪菌移植是将健康人或动物粪便中的功能菌群，通过某种手段移植到患病人或动物肠道中，重建肠道菌群平衡并治疗肠道疾病的方法。此法已在人类医学中已经有了较多应用，但在动物上的研究尚为少数。
本试验采用Miseq高通量测序技术，以杜长大新生仔猪为试验对象，研究早期母源粪菌干预对新生仔猪肠道菌群发育的影响，并探讨其作用机理，旨在为动物生产的早期环境控制提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
本试验使用奶粉是由武汉爱文信生物科技有限公司生产的“宝宝乐”牌奶粉。乳猪配合饲料符合GB13078饲料卫生标准。试验动物为杜长大新生仔猪14只，随机分为两组。母猪试验饲粮参照NRC（1998）肥育猪营养需要配合而成。试验过程中用到的PBS溶液、CATB缓冲液、0.9%生理盐水、10%无菌甘油等实验试剂，以及无菌自封袋、灭菌纱布、离心机、锆珠管、珠磨式组织研磨器、Nano-Drop 1000分光光度计等实验器材，均由消化道营养与动物健康江苏省重点实验室，动物科技学院实验中心实验室（江苏省重点学科）提供。
1．2 试验方法
1．2．1 母源粪菌的制备[6]
（1）在仔猪出生前一周内，收集50 g母猪新鲜粪样置于充满CO2的自封袋中。
（2）冰盒转运至实验室并在粪样采集后2 h内进行处理。
（3） 在实验室中，将粪样置于合适的无菌容器中，分别加入250 mL无菌的生理盐水（0.9% NaCl溶液），且事先向生理盐水中通入CO2气体以除去溶解的O2，然后进行初步均质加工。