番茄白粉菌筛选拟南芥RNAi干扰库
毕业论文关键词：番茄白粉菌；侵染；拟南芥RNAi干扰库；抗性基因
Tomato Powdery Mildew Screening of Arabidopsis thaliana RNAi Library
Abstract:This research focuses on study the resistance genes of tomato powdery mildew (Oidium neolycopersici) by infecting the plants of Arabidopsis RNAi library, to provide valuable genetic resources for the disease-resistant breeding of tomato. Arabidopsis RNAi library plants were stained with the method of the DAB and trypan after inoculated with O. neolycopersici 5 days. The analysis of 120 strains of Arabidopsis RNAi library plants showed that most interference library plants and wild type Arabidopsis were susceptible, while 3 strains had a certain extent resistance, which would be identified of the genes in them and to provide the theory basis to the tomato breeding.
Key words: Oidium neolycopersici; infection; Arabidopsis thaliana RNAi interference library; resistance genes
摘要 1
Abstract 1
引言 1
1.实验材料与仪器 2
1.1实验材料 2
1.2实验试剂 2
1.3实验仪器 3
2.试验方法 3
2.1拟南芥RNAi干扰库种子消毒 3
2.2番茄白粉菌侵染拟南芥RNAi干扰库植株 3
2.2.1番茄白粉菌的接种 3
2.2.2白粉菌接种后的培养 3
2.2.3拟南芥干扰库植株的取样与DAB和台盼蓝双染色步骤 3
2.2.4样本的制片与镜检 4
3.结果与分析 4
3.1 野生型拟南芥的侵染情况 4
3.2 拟南芥RNAi干扰库 4
4.讨论 6
参考文献 8
致谢 10
番茄白粉菌筛选拟南芥RNAi干扰库 引言
番茄白粉病是一种世界性植物病害，近年来在我国危害愈来愈严重[1]，给我国的番茄生产造成很大危害[2]，尤其是反季节番茄的栽培[3]，因其条件比较适宜白粉菌的生长，可导致番茄的减产，更为严重时可导致番茄植株的死亡[4]。传统化学方法的防治，不仅对生态环境造成一定的危害，且农药残留严重影响了蔬菜的品质，因此，利用分子手段培育白粉菌抗病品种尤为重要。
番茄白粉菌主要侵染番茄的叶、茎等部位，初为不规则的白色小斑，随着病斑的扩大，蔓延至整个叶片、茎的大部分位置，不久叶片枯萎、脱落。白粉菌通过吸器吸收叶肉表皮细胞养分，完成自己的生长周期，其生长周期一般为7d。分生孢子梗是判断植物对白粉菌感抗性的一个重要指标，5d可产生分生孢子梗，从而完成无性生活周期[5-6]。
2000年12月由美国、欧洲和日本等国科学家共同完成了对模式植物拟南芥的全基因组序列测定，它由5条染色体构成，包含约1.2亿个碱基对，编码约2.57万个基因，并阐明了1000多个与抗逆、抗病、开花、发育调控等与农作物农艺性状密切相关的功能基因。但50%以上基因功能不确定，其中31%基因的功能完全未知[7]，因此对拟南芥的研究还具有广阔的空间[8-10]。
拟南芥RNAi文库依据滚环复制的原理，其原理是，RNAi是由双链RNA引发的转录后基因沉默现象，由dsRNA产生的小分子siRNA，随后siRNA进入RNA诱导的沉默复合体，导致生物体内同源转录产物特异性降解[11]。拟南芥RNAi干扰库的建立，创建了新的发夹RNA构建系统[12]，应用于植物基因的研究，是基因表达调控的重要方式之一，也是功能基因组学研究的重要手段[13]。RNAi作用具有高效性、特异性、ATP依赖性、可传播性和可遗传性等特点，RNAi植物突变体也增加了病毒感染的几率[14]，其高度序列专一性使特定基因沉默而获得功能丧失或降低突变，从而确定其功能，因此，可利用拟南芥RNAi突变体库挖掘具有重要性状的基因成为功能基因组学研究的趋势[15]。本研究拟利用白粉菌侵染拟南芥RNAi干扰库中，找到番茄白粉菌的拟南芥RNAi干扰库抗病植株，为番茄的抗病育种提供基因资源。