本研究采用超声波辅助提取法,通过改变提取的超声温度、料液比、乙醇浓度以及超声提取时间等因素考察葛根素的提取效果,再结合响应面法,从而优选出超声波法提取葛根素的最佳条件。
1 材料与方法
1.1材料与试剂
葛根,购于周口同和堂药店;
蒸馏水,周口师范学院自制;
葛根素标准品(CP),国药集团化学制剂有限责任公司;
无水乙醇为分析纯。
1.2仪器设备
AL-204电子天平                  梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;
HHS 6恒温水浴锅                 巩义市予华仪器有限公司;
FW高速万能粉碎机               北京科伟永兴仪器有限公司;
SHB-Ⅲ循环水式真空泵            郑州欧卡仪器设备有限公司;
HWSI 2型电热恒温水浴锅         上海一恒科技有限公司;
KQ-2200型超声波清洗器          昆山市超声仪器有限公司;
UV-5100型紫外可见分光光度计    上海元析仪器有限公司。
1.3实验方法
1.3.1原料的预处理
挑选优质葛根,去除杂质,粉碎葛根,粉碎后过80目筛备用。
1.3.2标准曲线的绘制
用电子天平准确称取葛根素标准品3 mg,用70 %乙醇溶解并定容至50 mL,所得溶液作为标准品的母液[6]。使用移液枪精密吸取母液0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL母液,分别置于10 mL容量瓶中,并用70 %的乙醇定容至10 mL,在250 nm波长下测定吸光度[7-8],以吸光度(A)和质量浓度(C)进行回归分析,得回归方程:y=28.267x-0.0050(R2=0.9986)。(如图1所示)
图1 葛根素标准品的标准曲线
1.3.3葛根素的测定方法
准确称取定量的葛根粉,加入一定体积的乙醇浸泡处理10 min后进行超声波提取,提取后将所得的溶液进行抽滤,得到澄清的滤液,滤渣再次在同样的条件下超声处理,两次滤液混合并定容至50 mL备用,取60 uL提取液用一定体积分数的乙醇定容至10 mL,在250 nm波长下测定吸光度。根据标准曲线的回归方程,计算葛根素的提取率。
葛根素提取率的计算方法:
葛根素提取率% = 葛根素含量(g)/ 葛根质量(g)×100 %
1.3.4实验设计
固定超声波提取条件,通过单因素试验,研究超声时间、超声温度、料液比和乙醇浓度对葛根素提取率的影响,每个实验做三个重复;在单因素实验的基础上,通过方差分析,得出超声时间、超声温度和乙醇浓度三个单因素为影响提取率的关键因素(P<0.05),然后采用响应面试验确定出最佳的超声波提取条件。
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