对小麦不同生长时期叶片气孔指数的观察(2)
最近对小麦气孔最新研究有NO对气孔运动的调控，张旭成等人发现NO一方面作为ABA（脱落酸） 的下游信号分子诱导依赖于ABA的气孔关闭，另一方面NO可以和H2O2协同诱导气孔关闭[11] ；2006年Jo Bright发现在拟南芥保卫细胞中，ABA介导的NO的产生实际上依赖于ABA诱导产生的H2O2产物，在NO清除剂清除NO的条件下，由过氧化氢所诱导的气孔关闭作用会受到抑制，ABA和H2O2都能够促进NO生成[12]。
在气孔的运动机制方面，王学臣等发现保卫细胞内源的胞外钙调素可作为细胞外第一信使，协同其它信号分子一起调节气孔的开闭运动[13]；2007年崔香环等发现水孔蛋白可能介导FC（壳梭孢菌素）和微丝骨架等，从而实现对气孔运动的调节[14]；2012年Stefan Meyer发现拟南芥保卫细胞的气孔运动需要AtALMT12（R型阴离子通道），植物缺乏AtALMT12基因时，在黑暗和CO2诱导的气孔关闭,以及应对干旱胁迫激素脱落酸的处理下容易受损[15]。
通过对以上气孔研究进展分析，结合周口本地区的小麦研究现状，我觉得对周麦品种进行研究具有很大的生产研究意义。因此我决定对不同生长时期下的小麦气孔指数进行研究，如小麦气孔的直径，宽度，气孔密度，气孔指数等，从而了解小麦生长周期中不同阶段气孔形态的变化。本实验的实验材料是周麦19，周麦22，以及周黑麦一号，河北黑麦，周口师范学院试验田小麦。将利用透明胶带粘取叶片下表皮法和琼脂糖印迹法获得小麦叶片的下表皮，之后制作临时装片在显微镜下进行拍照，最后记录数据并分析。
1.材料与方法
1.1供试材料
供试小麦品种为周麦19、周麦22、周黑麦一号、河北黑麦，以及周口师范学院试验小麦。
1.2供试试剂与仪器
主要试剂：福尔马林- 醋酸- 乙醇固定液(500mL)、1% 孔雀石绿染液(100mL)、1% 的碘- 碘化钾染液（100mL）
实验仪器：显微镜 (OLYMPUS-BX41)及显微镜专用图像分析软件、光照培养箱（上海一恒公司）、电炉、电子天平（梅特勒公司）、500mL烧杯、100mL烧杯、培养皿、100mL棕色容量瓶、500mL容量瓶、玻璃棒、透明透明胶带、双面胶、剪刀、刀片、滤纸、解剖针、载玻片。
1.3材料的培养与处理
1.3.1小麦的培养
挑选籽粒饱满的周麦19，周麦22，河北黑麦，周黑麦一号种子各240粒（如果是当年的种子需在4℃条件下破除休眠，24h）置于小烧杯中用蒸馏水冲洗三次。用75％的酒精溶液浸泡1min，然后用蒸馏水冲洗三次，每次1min，除去小麦种子上残留的酒精，冲洗后再用蒸馏水浸泡45-60min，之后再用蒸馏水冲洗一遍。
浸泡过后将种子分别分装在培养皿中，每个培养皿中60粒，共16个培养皿，每种在培养皿底部垫一层滤纸（避免水分蒸发过快），用保鲜膜包起来后在膜上扎上小孔，有利于种子进行呼吸。
小麦属于短日照植物，因此恒温培养箱的条件设置为白天11小时，晚上13小时，恒温25℃，湿度为33%。小麦培养期间每天早上，中午，晚上定时加水换水。每天记录小麦品种的发芽率，培养十五天左右。
1.3.2琼脂糖印迹法
①叶片材料的固定：分别取培养15 天左右的周麦19，周麦22，周黑麦，河北黑麦的第二片叶从叶根部剪下，以及大田中未抽穗和抽穗的小麦的剑叶、倒二叶、倒三叶分别置于100mL小烧杯中，贴上标签，加入固定液至刚好淹没叶片为止，固定24小时。
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