本研究通过对120份水稻自然群体材料穗瘟抗性进行全基因组关联分析，期望能够挖掘出新的稻瘟病抗性基因，为抗性基因的克隆打下基础，进一步应用于水稻稻瘟病抗性遗传育种实践当中。

1 材料与方法

1.1供试品种

本试验共120水稻自然群体材料，来源于本实验室从美国USDA ARS Dale Bumpers国家水稻研究中心引进的413份材料，见附表1。

1.2供试菌系

本试验使用了稻瘟病菌生理小种的日本鉴别菌系北一（由南京农业大学国家重点实验室提供）。

1.3材料种植

首先对120份水稻自然群体进行灌种，每个材料灌30-40粒于网袋中（12cm×9cm），用10%的浸种灵（1︰5000）浸种3天（每过24小时换一次水）用于杀菌消毒并促进种子萌发，3天后用自来水冲洗干净，留有少量自来水用保鲜膜封盖桶或者盆催芽至露白（一般催芽1-2天）。将露白后的种子拿到南京农业大学江浦实验站试验田中的育秧田进行育苗，25-30天后，移栽育秧田中的幼苗至试验田中，每个品种种植3行，一行8株。待幼苗生长至孕穗期进行注射接种。

1.4 稻瘟病菌的培养与接种

1.4.1 稻瘟病菌的培养

稻瘟病菌的培养参照方中达的方法（1998）进行。供试病原菌在马铃薯培养基（马铃薯200g，加1000ml水煮汁，过滤，加葡萄糖或蔗糖20g，琼脂20g，补水至1000ml）上培养一周后，移接至玉米粉稻秆汁（稻秆节50-60g，加1000ml水熬汁，过滤，加玉米粉40g，琼脂20g，补水至1000ml）培养基上产孢。将制备好的培养基湿热灭菌20-30分钟（121℃）。在无菌操作台上将培养基倒入已灭菌的培养皿中，培养基厚度约为5毫米，将病菌移接至培养基上。在26-28℃的恒温培养箱内培养10-20天，然后移至黑光灯下培养7天左右，诱导其产生孢子。

1.4.2 稻瘟病菌的接种

孢子菌悬液的配制：用经过高压灭菌锅灭菌后的蒸馏水洗下(用软毛刷子)培养基表面的分生孢子，经两层纱布过滤后的母液，再通过10×10倍显微镜检测孢子液的浓度，然后加灭菌后的蒸馏水将孢子悬浮液配制成浓度为5×104个孢子/ml（约40-50个孢子/视野），并加入0.02% Tween-20作为表面活性剂。

接种：对测序后的120份水稻自然群体材料进行孕穗期注射接种穗瘟，使用医用注射器（0.7×32mm）于傍晚接种，每个品种共接种3株，每株接种2到3个穗，以确保试验结果的正确性，每个穗子接种3-5ml，共6-9个接种穗。并于接种两周（15-20天）后进行取样调查[22]。