国内外LPPs的研究主要集中在动物中，且相对成熟[6]，而在高等植物的拟南芥中只有相对较少的研究。拟南芥有4个LPPs基因，它们在拟南芥中的定位号分别为AtLPP1（At2g01180），AtLPP2(At1g15080)，AtLPP3(At3g02600)，AtLPP4(At3g18220)[1]。它们在拟南芥中的作用是催化水解焦磷酸甘油二脂 (DGPP)去磷酸化生成磷脂酸（PA），并进一步催化磷脂酸（PA）去磷酸化生成二酰基甘油 (DAG)[3]， 它们在细胞膜上的作用主要用于维持焦磷酸甘油二脂(DGPP) 、磷脂酸（PA）、二酰基甘油（DAG)三种物质的平衡[2]。目前关于植物中LPPs的研究还比较少，LPPs很多的性质还不清楚，特别是蛋白水平上的研究，关于这个酶的具体功能、活性等有待进一步的研究。

盐胁迫下，拟南芥细胞中的焦磷酸甘油二脂 (DGPP)和磷脂酰基醇-4,5-二磷酸含量会明显上升[7]。这说明盐胁迫下，脂物质参与了细胞内的盐信号途径。前期研究表明，AtLPP2作为管家基因在各种胁迫下含量基本保持不变，LPP2主要在拟南芥的萌发过程中通过磷脂酸（PA）信号途径起作用，它对种子的萌发起到抑制作用[2]，而AtLPP1则不同，它广泛响应各种生物和非生物逆境[4]（图1-A）。

拟南芥中LPP1参与盐胁迫信号途径，研究表明lpp1纯合突变体对盐胁迫敏感，与野生型相比，植物体内有更多的钠离子积累，同时更多的钾离子流失[8]，引起植株严重失水，而且植株体内的脯氨酸含量显著上升，最后导致膜电解质渗漏率上升，膜破裂，植株死亡。探其原因在于，AtLPP1的缺失直接导致其下游产物即细胞膜上的磷脂酸（PA）减少，从而降低了植物的耐盐性[4]。而在现在的研究中,该基因应答信号的分子机制与LPP1蛋白的定位还不是很清楚，一些重要的分子机制尚不明确，LPP1是如何作用的机理还不太清晰。我们研究LPP1基因旨在揭示其抗盐的分子机理，为遗传育种提供一条新的重要道路。

 图1：盐胁迫下，四种LPPs在不同时间段相关表达量的变化

1  材料与方法 

1．1  实验材料

1．1．1  拟南芥遗传材料

拟南芥lpp1突变体株系：SALK-129705、CS876901、CS875534、CS872267购于Arabidopsis Biological Resource Center。野生型（Col-0）拟南芥植株由章文华教授实验室提供。

1．1．2  实验载体及菌株

表1.实验载体及相关菌株

载体（菌株）名称： 抗性： 来源：

pGEM-T vector Ampicillin TakaRa公司

PBI101 Kanamycin 章文华教授实验室

GFP-1300 Kanamycin 章文华教授实验室

AtU6 Kanamycin 鲍依群教授实验室

Cas9 Spectinomycin 鲍依群教授实验室

DH5α ---- TakaRa公司

GV3101 利福平+ 章文华教授实验室

1．1．3  实验试剂

表2.实验试剂

实验试剂： 来源：

限制性内切酶 Thermo

Taq DNA聚合酶 上海翔圣生物公司

DNA Ligase/KOD/DNA marker TakaRa/Thermo/NEB

质粒提取/PCR产物/琼脂胶回收试剂盒