表2 Real-time PCR反应程序 9

表3 TGFBR2基因在徐淮山羊胎羊不同组织中的表达量 10

1 绪论

我国养羊业历史悠久，山羊品种资源丰富，养羊数量和羊肉产量均居世界第一位[1]。山羊是一种繁殖率高、对环境适应性强、生产成本低、发展潜力大的动物，目前我国许多地方都进行大规模的山羊养殖。改革开放以后，中国对山羊的饲养规模逐渐扩大，饲养数量逐年增加，并且不断增加丰富对山羊的养殖经验，山羊产业成为我国大部分地区畜牧业中的重要支柱。由于我国地理条件的独特，山区大于平原，所以山羊饲养具有先天的优势。运用一定的生物技术，进行合理的人为调控，可有效改良山羊的生产性能进而提高生产效益。目前国内外对于山羊功能基因的研究很少，因而在分子生物学上，关于山羊的研究远落后于绵羊等其他家畜。

中国是山羊品种资源最为丰富的国家，有许多品质优良而各具特色的地方品种，如长江三角洲白山羊、南江黄羊、徐淮山羊等。徐淮山羊主要产地在徐州和淮安一代，属于兼用型山羊地方品种。其主要分布于徐州市的丰县、沛县、铜山、睢宁四县，其中睢宁县的山羊数量最多；以淮阴市的泗洪、泗阳、宿迁等县数量较少之。此山羊品种产地环境多为沙碱地质，土地贫瘠。在当地百姓长时间的辛苦劳作下进行繁殖选育，逐渐形成有早熟、产多羔、耐粗放等优良特点的徐淮山羊品种。

TGFBR2基因是转化生长因子β超家族中的一员，在哺乳动物细胞生长和分化等方面发挥着重要作用。TGF-β基因超家族的成员有如下特征：(1) N-端有1段信号肽序列，可借以跨过内质网；(2) 紧挨着生物活性区存在着由4个AA（RSRR）组成的蛋白酶加工位点；(3) C-末端有9个保守的Cys的生物活性区，靠分子间的二硫键从而形成二聚体[2]。TGF-β与早先报道的从非洲绿猴肾上皮细胞BSC-1所分泌的生长抑制因子是同一物[3]。近些年相关研究发现，TGF-β基因在细胞增殖分化及免疫等方面有着重要的调节作用[4-7]。在心脏的发育过程中能够探测到TGFBR2基因的存在，且敲除基因的小鼠胚胎有先天性心脏缺陷的表现[8]。毛峰峰等人的研究发现在成骨细胞中敲除 TGFBR2 基因会导致骨体积和骨形成的下降[9]。近年来很多研究表明，TGFBR2 基因在肝细胞肝癌组织中的表达有着不同程度的下降，并且TGFBR2基因的表达缺失与肝细胞肝癌的恶性程度、复发转移以及患者生存期密切相关[10]。

本次实验主要是研究TGFBR2基因在徐淮山羊胎羊八种不同组织间的表达量及差异情况，在此之前虽有很多文章是研究TGFBR2基因的，但没有发现其在徐淮山羊胎羊组织中表达量差异性的相关研究。但是TGFBR2基因在当地品种中又以什么样的结果示人，研究过程中是否会有新的发现，我们不得而知，借此来了解TGFBR2基因的结构功能。

2 实验过程及方法

2.1过程

采集组织块 → 提取总RNA → 反转录 → RT-PCR → 数据处理 → 分析结果 → 论文。

2.2实验材料

2.2.1材料的采集

   采集徐淮山羊胎羊的各部分组织块，心、肝、脾、肺、肾、肠、背、腿（一般称重为0.2g以上）放置于冰冷的生理盐水中漂洗，拭去组织间隙中的血液，包裹于滤纸中吸干，准确称量，放入冻存管或离心管中-20度可以保存3个月，-80℃可以保存半年。

2.2.2实验仪器