众所周知,昆虫是自然界中最大的一个生物类群,约占全部生物种类的55%,几乎所有的生态环境中都分布有各种各样的昆虫(Chemysh S et al,2002)。昆虫不像高等脊椎动物那样具有T细胞和B淋巴细胞,也没有免疫球蛋白和完善的补体系统,但是昆虫之所以能够在千变万化的自然界中占据极大的生存优势,是因为它们具有独特而有效的免疫系统。昆虫体腔内的免疫由血淋巴来完成,昆虫的血淋巴,占体重的1/5一1/3,其血管系统为开放性,组织液与血液是混合在一起,是极其重要的组成成分。而寄生蝇在寄生寄主后,会在多个层次上攻击寄主的免疫系统,最终导致寄主的死亡。因此对于线纹折麻蝇在寄生东亚飞蝗之后,寄主血淋巴蛋白质组的研究具有重要的理论意义和应用价值。
蛋白质组学(Proteomics)是研究蛋白质组或应用大规模蛋白质分离和识别技术研究蛋白质组的一门学科,是以细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式为研究对象。蛋白质组学研究的内容不仅包括对各种蛋白质的识别和定量化,还包括确定它们的细胞内外的定位、修饰、相互反应、活性,和最终确定它们的功能。功能蛋白质组学是位于对个别蛋白质的传统蛋白质研究和以全部蛋白质为研究对象的蛋白质组研究之间的层次,研究特定时间、特定环境和试验条件下基因组所表达的蛋白质(刘峰,2006)。蛋白质组研究的两大主要技术体系分别是以双向电泳为基础的分离技术和以质谱为基础的鉴定技术,目前世界上公认的经典研究方案是“研究材料获得-双向电泳-质谱”的技术路线。
目前采用的昆虫生物防治措施最大优势是能够降低化学药剂对环境的恶劣影响,但本身在实践推广应用中的缺陷也是显而易见的,如生物制剂发挥作用有一定的延缓性,技术成本相对较高,受到特定环境条件的限制等。只有减缓这些因素的制约,生物防治技术的发展与应用才能更广泛推广。随着研究方向的不断改善,以开发新的生物防治手段如对寄生蝇等开发利用成为了生物学研究热点。为此,本论文利用双向电泳技术研究东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis)被线纹折麻蝇寄生前后血淋巴蛋白质组中的差异蛋白,探讨线纹折麻蝇寄生东亚飞蝗的可能分子机理,为进一步研究利用寄生蝇对控制蝗虫为害的生物防治作用提供一定的理论依据。
2.主要的材料与方法
2.1 供试虫源
自内蒙古收集被线纹折麻蝇寄生的亚洲小车煌、鼓翅皱漆煌等蝗虫,室内育出线纹折麻蝇成熟蝇蛆,在实验室条件下化蛹,再经孵化为成蝇,任其自由取食蔗糖、奶粉、干酵母及饮用水,并提供东亚飞蝗为寄主续代饲养,301,16L:8D人工气候条件下建立实验室种群。
2.2实验仪器及试剂耗材`优尔^文:论;文'网www.youerw.com
2.2.1 常用仪器
移液枪:德国Eppendorf公司生产,规格为2μL,10μL,200μL,1000μL。
超纯水机:ELGA,英国公司UL TRAGENETIC型超纯水器。
双重水蒸馏器:上海亚荣生化仪器厂SZ-93型双重水蒸馏器。
灭菌器:日本HIRAYAMA公司HVE50型全自动高压灭菌器。
电子天平:Mettler公司AE204E型电子分析天平。
电热恒温鼓风干燥箱:上海精宏实验设备有限公司DHC-9423A型电热恒温鼓风干燥箱。
超低温冰箱:美国NBS公司U410型超低温冰箱。
酶标仪:BIO-TEK 仪器公司XL-800型酶标仪。
显微镜:Leica DM6000B显微镜。
双向电泳系统:Bra-rad公司的整套双向电泳系统,主要包括如下仪器
第一向等电聚焦仪:Protean IEF