此外，种子植物中提取的黄酮类化合物已被证实具有广泛的生物活性，如松弛血管痉挛、抗心肌缺血、降血脂、抗肿瘤、抑菌、保肝等，而苔藓植物黄酮活性的研究甚少，这不利于苔藓植物资源的开发利用。

本次研究以天目山区系为实验样地，按照不同生境搜集苔藓植物进行总黄酮含量的测定，为苔藓植物的黄酮类化合物的研究提供基础数据，为苔藓植物资源的开发应用提供更广阔的空间。

2实验过程

2.1研究地区概况

西天目山国家级自然保护区位于浙江省西北部临安市境内，东经119°24'11"，北纬 30°21'37"。天目山地区地处中亚热带边缘，濒临我国东南沿海气候属于亚热带季风型，温暖湿润，雨量充沛，雨雾缭绕，地貌复杂，人为干扰较少。整个山区地区由于受地形变化，海拔高度等影响使得植物生长茂盛，植物种类繁多，植物资源丰富，是地球上珍贵的天然基因库。

天目山地区的苔藓资源也同样非常丰富。现报道西天目山有苔类22科33属70种，藓类39科110属240种[9]。李粉霞等研究发现海拔1100 m处落叶阔叶林下的苔藓植物种类最多，物种丰富度最高；海拔800~1100 m之间，苔藓植物的物种变化速率最快，种类更替最明显[10]。苔藓物种多样性变化对苔藓植物保护和森林生态系统健康起着重要的预警作用，汪岱华等比较了该地区1977–2011年间苔藓植物物种多样性的变化，结果表明：在过去的30年间，该地区苔藓植物的科、属、种数均呈下降趋势，苔类植物的属、种数减少尤为显著[11]。

2.2采样路线

2013年7月份、9月份，于天目山地区的低海拔、中低海拔及高海拔地区进行3次野外采样调查。其中调查的重点为本山的东南坡，主要采样路径是从禅源寺经太子庵、一里亭、三里亭、五里亭、七里亭、老殿而达仙人顶的登山大道；另一条采样路径是从禅院寺经浮玉山庄、忠烈寺最后到达红庙的公路山道。共采集苔藓样本241份，其中有效作为后期苔藓黄酮实验材料96份。

2.3材料处理

野外采样样本通过剪除、筛选到达初步分离纯化的目的，再对初步分离纯化的苔藓样本进行清洗`优尔~文-论+文'网www.youerw.com、二次分离及纯化，并将其进行烘干、保存。最后得到绿色无其他杂质的苔藓样本，用以黄酮提取、黄酮总量的测定。并在显微镜和解剖镜下对所采样的所有原始样本进行图像摄取，通过参考相关资料及对照标本进行苔藓样本的鉴定。最终确定了96种苔藓样品。

2.4仪器药品

蒸馏水（单蒸水和双蒸水）；芦丁（中国药品生物制品检定所）；乙醇（A.R）；亚硝酸钠（A.R）；硝酸铝（A.R）；氢氧化钠（A.R）。紫外-可见分光光度计（购自上海欣茂仪器有限公司）；芦丁（中国医药集团山海化学试剂公司提供）；超声波发生器（频率20kHz）；移液器，电子天平，恒温水浴锅（购自上海欣茂仪器有限公司）。

2.5实验方法

2.5.1 苔藓样品黄酮的提取（超声波提取法）

超声波提取是利用超声波空化作用加速植物有效成分浸出的提取。首先，用电子天平秤准确称取苔藓样品粉末1g于100ml锥形瓶中，加入25ml 60%乙醇、25ml单蒸水，于50℃水浴锅内水浴2h，使黄酮充分溶解于溶液中。冷却后，超声提取20min，并对其进行抽滤，收集含有黄酮的滤液论文网，滤渣置于锥形瓶，加入25ml 60%乙醇，再在50℃水浴锅中水浴2h，重复以上超声提取和抽滤过程，得滤液，将所得的两次滤液合并，弃滤渣。减压蒸馏回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，置于100ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。