中国药用植物资源十分丰富，有很多特有种属植物，比如喜树就是我国特有的药用植物。但是现今，我国大多数的药用植物栽培还是处于过去那种粗放式的混合种植方式，这导致了很多药用植物处于不同种或者遗传性差异较大的混合栽培水平上[6]，直接导致了我国的药材品质处于较低的水平难以提高。 

目前，绝大多数科研人员和机构对喜树的研究集中在喜树生长发育规律[7]、喜树碱及其衍生物的抗癌活性的开发和利用上，对于喜树的生殖生物学方面的研究则尚处于空白阶段。近年来，随着药物植物的需求不断上升的现状则是我国的药物植物资源问题不断，最主要的原因是我国对植物生殖生物学不够重视导致绝大多数药用植物的栽培处于较差的水平，使得药材的品质出现了严重的危机。近年来，由于全球癌症发病率和死亡率急剧上升，市场对喜树碱这类生物抗癌药物的需求不断增加，喜树的研究已经进入了快速发展阶段，所以对喜树的生殖生物学特别是胚胎发育学方面的研究则显得更为迫切。

胚和胚乳的发育过程是植物胚胎学一个重要的研究课题，胚和胚乳都为植物双受精后的产物，它们在发育过程中有着密切的关系。胚最后成为新一代独立生活的孢子体[8]，而胚乳则是作为一种营养组织，在胚发育过程中降解为营养物质或则在种子发育中其作用。

    本实验以喜树为研究材料，对喜树的胚胎发育过程采用石蜡切片法以研究喜树胚乳发育过程。利用组织切片结合组织化学染色技术，研究胚乳发育过程中各部分结构的细胞化学变化，大分子营养物质—淀粉、蛋白质和脂类在发育过程中的动态分布情况和变化规律，为喜树的育种生产及科研提供理论参考，对喜树资源的保护和开发利用有重要的意义。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 喜树花的采集与保存

    喜树的花序和果实于2014年6月底到9月初采集自杭州师范大学仁和社区15幢前的两株成熟喜树，从喜树花开时期开始每隔一天进行采集，每次采集5个花序，以便形成连续完整的花的发育过程。进入8月份后，喜树果实发育已趋于成熟，故改为每隔5天进行采集。采集好的喜树花和果实使用FAA固定液（50%酒精:冰醋酸:甲醛=90:5:5）进行固定和保存。

1.1.2 实验所用试剂以及仪器

    实验中所需的试剂有无水乙醇、二甲苯、石蜡、番红染液，考马斯亮蓝R250染液、苏丹红IV号染液、铁矾溶液、苏木精溶液。仪器有抽气机、烘箱、切片机、烤片机、染色缸、最后使用荧光数码显微镜进行镜检和照像。

1.2 取样

    采集好的喜树花按照时间进行排序，取下各个时期喜树花序中的小花，去除苞片、花被和雄蕊后将雌蕊（可育子房） 放入新配制的FAA固定液中保存24小时后开始进行实验。

1.3 实验方法

    采用连续石蜡切片法对喜树的可育子房进行切片观察，切片的方向为纵切以便得到胚乳的完整切面。经历以下几个环节：脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烘片、脱蜡、染色、封固、镜检[9]后拍照保存完整的发育图片。切片厚度为8-12μm，染色时使用组织化学染色法对切片进行染色，本实验中对胚乳的发育过程染色采用的是铁矾-苏木精染色法，由于这种碱性燃料对细胞核内的染色质和细胞质内的核糖体着色效果较好；使用PAS染色法鉴定各时期胚乳储藏物的多糖（主要是淀粉）含量；鉴定蛋白质含量使用的是考马斯亮蓝染色法；使用苏丹红Ⅵ号染液对胚乳中的脂类进行染色观察。