2实验过程

2.1研究地区概况

浙江天目山国家级自然保护区位于浙江省西北部临安市境内，东经119°23′47″～119°28′27″，北纬30°18′30″～30°24′55″，主峰海拔1506米，所辖地域总面积4300公顷。天目山地区地处中亚热带边缘，濒临我国东南沿海气候属于亚热带季风型，温暖湿润，雨量充沛，雨雾缭绕，地貌复杂，人为干扰较少。整个山区地区由于受地形变化，海拔高度等影响使得植物生长茂盛，植物种类繁多，植物资源丰富，是地球上珍贵的天然基因库。

浙江天目山国家级自然保护区蕨类植物资源丰富，常见的蕨类植物主要有贯众（Dryopteris setosa (Thunb.) Akasawa）、对马耳蕨（Polystichum tsus-simense (Ho-ok.)J.Sm.）、阔羽众（Cyrtomium yamamotoi Tagawa）、有柄石韦（Pyrrosia petiolosa (Christ) Ching）、假长尾复叶耳蕨（Arachniodes pseudo-simplicior Ching）、日本蹄盖蕨（Athyrium niponicum）、长尾复叶耳蕨（Arachmiodes simplicior(Makino)Ohwi）、同形团扇蕨（Gonocormus minutus）、鳞毛蕨（Dryopteris uniformis Makino）、井栏边草（Pieris multifida）、延羽卵果蕨（Phegopteris decursive～pinnata ）、紫萁（Osmunda japonica Thunb）、凤丫蕨（Coniogramme japonica (Thunb.) Diels）、江南卷柏（Moellendorf'sSpikemossHerb）、暗鳞鳞毛蕨（AspidiumcycadinumSav.;D.atrata(Wall.)Ching）、银粉背蕨（Aleuritopteris argentea）等22种。

云南省位于中国西南边陲，北回归线穿越省境南部，横跨北热带、南亚热带、中亚热带、北亚热带、暖温带、中温带和高原气候区等7个温度带气候类型，因为地形和气候多样性，云南省动植物资源均十分丰富。云南省的蕨类植物主要有有盖肉刺蕨（Nothoperanema hendersonii）、单牙狗脊（Woodwardia unigemmata）、密果耳蕨（Polystichum pycnopterum）、半育耳蕨（Polystichum semifertile）、苏铁蕨（Brainea insignis）、联合鳞毛蕨（Dryopteris conjugata）、石韦（Pyrrosia lingua）、友水龙骨（polypodiodes amoena）、光亮瘤蕨（Phymatosorus cuspidatus）、紫萁、泡鳞轴鳞蕨（Dryopsis mariformis）、滇东楠钩毛蕨（Cyclogramma neoauriculata）、狗脊蕨（Woodwardia japonica）、皱边石杉（Huperzia crispata）、白桫椤（Sphaeropteris brunoniana）、厚叶铁角蕨（Asplenium griffithianum）、云南凤尾蕨（Pteris yunnanensis）、椭圆叶马尾杉（Phlegmariurus henryi）、半圆盖阴石蕨（Humata platylepis）、单行节肢蕨（Arthromeris wallichiana）等蕨类。

正因为浙江天目山地区与云南省在地势地形、纬度、光照、水分等环境因子差异显著，导致其蕨类植物种类差异较大，而这些蕨类植物体内的总黄酮含量及其抗氧化活性也具有差异，具有深入研究探讨的价值，这是我们选址的依据。

2.2实验材料

2.2.1 采样地点

于浙江天目山国家级自然保护区采样21科33属48种59份；于云南省采样 12科12属12种。

2.2.2 材料处理

采集后的样品全部进行以下预处理过程：样品采集后用水清洗后自然晾干；将每种蕨类植株中连着根部的根状茎和叶分离，分别烘干后粉碎；在正式实验前前用石油醚脱脂进行脱色、过滤后风干, 在温度设定为70℃的烘箱中烘2 h 取出，放入干燥器中备用[3-5]。

2.2.3 仪器药品

蒸馏水（单蒸水和双蒸水）；芦丁（中国药品生物制品检定所）；乙醇（A.R）；亚硝酸钠（A.R）；硝酸铝（A.R）；氢氧化钠（A.R）。紫外-可见分光光度计（购自上海欣茂仪器有限公司）；芦丁（中国医药集团山海化学试剂公司提供）；超声波发生器（频率20kHz）；移液器，电子天平，恒温水浴锅（购自上海欣茂仪器有限公司）。