4.基因克隆

基因克隆（gene cloning）发展于上世纪70年代，该技术是通过体外重组的方法，源`自·优尔~文;论:文'网[www.youerw.com将目的基因DNA序列插入到载体分子中，并使插入的基因片段在体外表达的一项生物工程技术。通过基因克隆技术，研究者们可以识别，分离某些特异基因并能够获得该目的基因的完整序列，再结合其他生物学技术来进一步研究目的基因在生物体内所行使的生物学功能。目前，通过科研工作者的不懈努力和生物学科的发展，已经克隆出很多与植物生长发育、抗逆性等有关的基因。一般的基因克隆是由五步构成的：1，目的基因片段的获得，目的基因可来源于基因组也可来源于mRNA反转录所得的cDNA。2，选择适用的载体，作为基因克隆的载体所具有的基本特性为：（1）具有在宿主细胞中独立复制表达的能力；（2）分子量不宜过大；（3）载体分子中应有易于筛选或检测的遗传标记以利于甄别并获得阳性克隆；（4）具有多克隆位点，易于外源基因片段的插入。3，体外重组，体外重组就是在体外将目的基因片段与载体分子相连接，可分为黏性末端连接和平末端连接，就连接效率来讲，后者的连接效率低于前者的连接效率。4，将重组子导入到宿主细胞中，将重组子导入到原核宿主细胞有三种方法：转化，转染和转导。5，筛选重组子以获得阳性克隆，一般有五种方法可筛选出阳性克隆：插入失活法（如蓝白斑筛选法）、PCR筛选和限制酶酶切法、核酸分子杂交法、免疫学筛选法。目前，基因克隆的方法主要有：功能克隆、基因芯片技术筛选新基因、图位克隆、同源序列克隆技术、差异表达基因的分离技术、表达序列标签技术、转座子标签技术。

5.拟解决的主要问题

（1）找出苦蘵基因的查尔酮异构酶和合成酶。

（2）克隆查尔酮苦蘵基因的异构酶和合成酶。

（3）构建基因的荧光表达载体。