常见稗草种对稻田土壤处理剂的敏感差异性及机理研究(5)
1．5 研究方法和目的
1.5.1 敏感差异性检测方法
常见的对杂草敏感性进行检测的方法是整株检测法。从长期单一使用过除草剂并怀疑有抗药性杂草生物型的田块或是从未使用过除草剂的田块采集杂草种子，播种于大田或温室中，在播后苗前或苗后进行常规施药处理，药剂设置不同剂量，观察比较不同剂量下杂草的出苗率、发芽和死亡率、叶面积、鲜重、干重等指标，并根据其测定指标与剂量的关系作出剂量反应曲线，求出ED50。Lopez martinez （1998）等人对稗属抗、敏生物型进行了比较研究，证明两种生物型的植株鲜重产生了变化。
1.5.2 GST方法
a)准备材料：在2～3叶期时，将一定样本量的幼苗的地上部分剪去，称重后于液氮或是-80℃保存。
b)提取蛋白：将叶片研磨后，用提取液提取叶片中的蛋白。
c)蛋白含量测定：采用考马斯亮蓝法。考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为（0～1 000）μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
d)活性测定：用分光光度计将提取液GST做CDNB测定，在340nm处反应10min，得出相关结论。
1.5.3 研究目的
通过以5种不同稗草种为供试材料，采用盆栽喷雾法研究5种稻田土壤处理剂对稗草影响差异的研究，对稗草对于不同稻田除草剂的敏感性差异进行评价；通过GST的含量变化，初步了解除草剂对于稗草种的解毒系统的破坏程度，进而得出不同除草剂的杀伤程度，为稗草对所选除草剂的敏感水平及大田安全有效实施杂草化学防除提供依据。
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