2 材料和方法 8

2.1 材料 8

2.1.1 菌株和质粒 8

2.1.2 试剂和仪器 8

2.1.3 培养基 8

2.2 方法 8

2.2.1 工程菌的构建 8

2.2.1.1 同源载体的构建 9

2.2.1.2 基因敲除 11

2.2.1.3 pBBR1MCS5-KT-atpAGD重组载体的构建及其在KT2440中的表达 12

2.2.2 工程菌对芳烃化合物的降解 12

2.2.2.1 苯甲酸标准曲线的绘制 13

2.2.2.2 工程菌对苯甲酸的降解 13

结  论 18

致  谢 19

参考文献 20

 1 引言 

生物技术在环境治理领域的应用已经有很多年的历史，其中比较早的是活性污泥法处理工业废水，还有就是生物修复技术，它是近20年发展起来的，并且存在很广阔的发展空间。微生物能够降解的污染物有很多，其中大致可分为多环芳烃（PAHs）、有机农药、有机颜料和染料、表面活性剂、酚类和卤代烃等。生物技术发展到目前，其在未来生活和社会中所具有的潜在优势是不可估量的，其中应用生物降解技术处理被污染的环境已经的到广泛的认可并取得了一定成就。它是一项绿色的科学技术，不仅经济、安全，并且能够降解低浓度的污染物，使其在环境中残留量少，由此可见它的应用前景是很被看好的。正因为微生物治理环境污染所具有的这些优点，所以世界各国越来越重视和关注对这项技术的研究，而相关的学者也都非常活跃的致力于该技术的研究。就国内而言，生物降解技术治理污染的环境主要是针对有机农药和芳烃化合物的生物降解。 论文网

1.1 微生物对有机农药的降解

近年来，有机磷农药的不合理利用和大量使用，给环境带来了严重的损害，国家对此相当重视，因此治理有机磷农药所带来的污染问题已成为了研究热点。有机磷农药造成的污染主要是水体污染和土壤污染，而在水体和土壤中许多能够降解有机磷农药的微生物种类，因此筛选出能够降解有机磷农药的为生物并通过突变和基因重组技术增强其降解能力方面的研究成为了实验室的研究重点。 

1.1.1 降解有机磷农药的主要微生物菌群 

表1 部分农药降解菌及其农药降解种类［1-2］

微生物种类 农药名称

假单胞菌属(Pseudomonas ) 甲胺磷、马拉硫磷、二嗓农、甲拌磷、敌敌畏、对硫磷、甲基对硫磷、辛硫磷、杀螟松、乐果

芽孢杆菌属(Bacillus)