1.4.2. 从已破碎组织中提取粗酶液的方法
现将常见的方法及每种方法的优缺点列表如下。
表1-1 常见从组织中提取粗酶液的方法及它们的优缺点
方法名称 优缺点描述
盐析法(一般用硫酸铵) 操作简单,但有时候加入盐后会引起pH的较大改变,需要实现调好pH,防止酶变性失活,而且盐析之后往往酶液中离子强度较高,需透析
有机溶剂沉淀法(常用的是乙醇) 操作方便,而且一般有机溶剂可以回收反复利用。缺点是有些有机溶剂的毒性以及易使蛋白质失活限制了它的应用
等电点沉淀法 成本低、操作简便,但一般蛋白质的等电点在偏酸性的范围内,如果这种蛋白质的pH耐受性不好,则适用这种方法
聚乙二醇沉淀法 操作简便、条件温和,而且聚乙二醇还对蛋白质有保护作用,提取蛋白质也比较完全[9]源:自~优尔·论`文'网·www.youerw.com/
双水相分离法 放大容易,一般10ml离心管的实验结果可以直接方法到工业规模;含水量大,且不易引起蛋白质的失活;不存在溶剂残留问题。缺点是影响因素较多,比如浓度、pH、离子强度等,所以前期摸索最佳双水相系统时比较繁琐
综上所述,每种方法都有各自的优缺点,对于本实验中用的提取材料鸭肝,将其破碎制成粗提液后,由于鸭肝组织中含有大量的脂肪,所以其粗提液粘稠度很高,对于上述的前四种方法,用来处理鸭肝粗提液时,或是没有办法使粗提液分为明显的沉淀和上清, 或是使几乎所有的蛋白质都沉淀下来了,对于本实验中酶活的提取没有实际的应用价值。而双水相分离法以及后来在本课题实验中应用的聚乙二醇——硫酸铵沉淀法则可以在一定程度上解决这个问题,只有解决这一步,才能继续进行后续的酶活提取步骤。