亚硝酸盐还原酶高产菌选育及发酵研究(2)
2.2.6亚硝酸盐还原酶提取方法 13
2.2.7 紫外线诱变 14
2.2.8 硫酸二乙酯诱变 15
2.2.9 培养基营养成分单因素实验 16
2.2.10 营养成分正交优化实验 16
3 实验结果与分析 17
3.1 出发菌的生长曲线测定 17
3.2 亚硝酸盐降解曲线测定 17
3.3 亚硝酸盐测定标准曲线的绘制 18
3.4 亚硝酸还原酶的提取结果 19
3.4.1考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度曲线 19
3.4.2 硫酸铵梯度盐析盐析结果 19
3.5 紫外线诱变 20
3.5.1 紫外线诱变处理菌体致死率实验 20
3.5.2紫外线诱变菌株的亚硝酸盐降解量 21
3.5.3 紫外线诱变菌株的酶活力 22
3.5.4 紫外线诱变菌株遗传稳定性实验 22
3.6 硫酸二乙酯诱变 23
3.6.1 硫酸二乙酯诱变菌种菌体致死率曲线 23
3.6.2硫酸二乙酯诱变菌株的亚硝酸盐降解量 23
3.6.3 硫酸二乙酯诱变菌株的酶活力 24
3.6.4 硫酸二乙酯诱变菌株遗传稳定性实验 24
3.7 培养基营养成分单因素实验结果分析 25
3.7.1 碳源的选择 25
3.7.2 氮源的选择 26
3.7.3 无机盐的选择 26
3.8 培养基营养成分正交优化实验结果分析 27
4 结论 28
4.1 紫外线诱变植物乳杆菌的工艺研究 28
4.2 硫酸二乙酯诱变植物乳杆菌的工艺研究 28
4.3 诱变菌株培养基营养成分单因素实验与正交优化实验 28
致谢 29
参考文献 30
1 绪论
1.1 亚硝酸盐的简介
亚硝酸盐是食品加工时常用的腌制剂，不仅能使食品呈良好色泽，而且还具有防腐和增强风的作用。但是，亚硝酸盐具有致癌作用，还会使血红蛋白失去携氧功能，因此研究食物中的亚硝酸盐残留及其降解情况，对食品工业及人类健康都具有十分重要的意义。
亚硝酸盐(NaNO2 、KNO2)作为国家食品卫生法允许使用的食品添加剂，在食品加工中被广泛使用，其重要作用在于：首先，亚硝酸盐与肌红蛋白反应，生成亚硝基肌红蛋白，呈粉红色，赋予食品诱人的色泽，即发色作用；其次，可以抑制微生物的繁殖，尤其是抑制肉毒梭状芽抱杆菌的繁殖，此菌可以产生肉毒毒素，引起食物中毒，即防腐作用；再有，可以使食品具有弹性，口感良好，消除原料的异，提高产品品质。硝酸盐也是通过微生物的作用，转化为亚硝酸盐而发挥同样的作用，但效果较亚硝酸盐为弱[1]。然而，亚硝酸盐残留过高对人有极大的危害，世界上因为亚硝酸盐超标而引发的卫生问题、安全事故时有发生，因此，食品中亚硝酸盐含量一直是食物安全性的焦点之一。世界上许多国家呼吁严格控制亚硝酸或硝酸盐使用量，并积极地研究利用化学 、生物技术的方法，来降低食品中亚硝酸盐含量。[2,3]
1.1.1 亚硝酸盐在食物中的来源
1.1.1.1 亚硝酸盐在蔬菜中的来源
蔬菜中的亚硝酸盐和硝酸盐的污染主要来源于化学肥料，尤其是氮肥的施用。氮肥施入农田后，部分被植物利用合成蛋白质外，大部分以铵态形式残留在土壤中，在氧化条件和土壤微生物的参与下产生硝化作用，转变为硝酸根(NO3-)，部分为植物(蔬菜等)吸收，部分随地表流失或渗滤到土壤深部，部分在反硝化作用下，以气态形式流入大气或在土壤中形成亚硝酸根离子(NO2一)，部分亚硝酸根离子也被植物所吸收。许多蔬菜中天然含有硝酸盐， 在食用时通过口中的细菌作用被还原成亚硝酸盐。[4]