(4)在槽内加入1×TAE电泳缓冲液,至液面覆盖过胶面。
(5)取2uL待检测的PCR扩增产物样品与2uL loading buffer混匀后,用移液抢加至凝胶的加样孔中。在第一个加样孔中加入DNA Marker。
(6)连接电泳仪和电泳槽,并接通电源,设置电压为120v,电泳时间为30min左右。
(7)电泳结束后,小心取出凝胶块,放于凝胶成像仪中观察并拍照。
2.6.3 菌株16S r-DNA序列测定与分析
经琼脂糖凝胶电泳检测后的PCR扩增产物送到上海生工生物工程有限公司进行测序分析,将测序结果提交到美国生物技术信息中心数据库NCBI(http://blast.ncbi.nlm. nih.gov/)中进行核酸的Blast比对。
3 结果与分析
3.1 菌株分离与菌落形态观察
从麦田土壤中分离划线培养得到的菌株。如图3-1所示,该菌在LB培养基上生长3d后,菌落呈深黄色,圆形,直径约为1mm,表面凸起,光滑,透明,边缘整齐。