至今，有着许多关于根际放线菌方面的研究报道，但尚未见到关于牛蒡根际放线菌研究的报道，牛蒡肉质厚实根肥大，可食用且营养价值高，作为一种具有多元价值的植物，开展牛蒡根际放线菌的研究，通过初步的分离、鉴定与筛选，寻找有潜在促生作用的菌株，为其生长和品质的改良方面提供资源和科学依据。

2 材料与方法

2.1 供试材料

2.1.1 四份牛蒡根际土壤

吉科(GK)、地黄(DH)、东北理想(DBLX)、东北(DB)

2.1.2 培养基

分离培养基[8]：

A. ISP 5

Glycerol 10.0 g；Asparagine 1.0 g；K2HPO4 1.0 g；Agar 15 g；H2O 1000 mL；调节pH 为7.2。

B. 海藻糖-脯氨酸培养基(HZT)

海藻糖2.0 g；脯氨酸1.0 g；MgSO4 0.3 g；KNO3 0.5 g；CaCl2 0.5 g；

Na2HPO4 0.3 g；Agar 15 g；H2O 1000 mL；pH 7.2。

C. 淀粉-精氨酸培养基(DF)

淀粉2.0 g；精氨酸1.0 g；K2HPO4 0.5 g；MgSO4 0.5 g；KNO3 1.0 g；NaCl 3.0 g；FeSO4 0.01 g;Agar 15.0 g；H2O 1000 mL；pH 7.2。

D. 改良HV琼脂培养基(改-HV)

腐殖酸钠1 g；Na2HPO4 0.5 g；KCl 1.0 g; MgSO4·7H2O 0.05 g; CaCl2 1.0 g; 复合维生素(核黄素1 mg，烟酸1 mg，泛酸钙1 mg，肌醇1 mg，生物素1 mg，p-氨基苯甲酸1 mg，VB1 1 mg，VB6 1 mg)，琼脂20 g; H2O 1000 mL; pH 7.2-7.4。

抑制剂：制霉菌素100 mg/L，萘啶酸25 mg/L

E. 改-ISP 5

甘油10 g;门冬酰胺1 g; K2HPO4·3H2O 1 g，微量盐(FeSO4·7H2O 0.1 g，MnCl2·4H2O 0.1 g，ZnSO4·7H2O 0.1 g，H2O 1000 mL)1mL; MgSO4·7H2O 0.5 g; CaCO3 0.3 g; 复合维生素(核黄素1 mg，烟酸1 mg，泛酸钙1 mg，肌醇1 mg，生物素1 mg，p-氨基苯甲酸1 mg，VB1 1 mg，VB6 1 mg); 琼脂20 g; H2O 1000 mL; pH 7.2-7.4

抑制剂：K2Cr2O7 50 mg/L文献综述

2.1.3 试剂

Sackowski’s显色剂 ：

150 mL浓硫酸溶于250 mL去离子水中，加入7.5 mL 0.5 mol/L的FeC13溶液。

PC显色液： 

12 g FeCl3溶于7.9 mol/L的硫酸。室温下保存于黑暗中。

Nessler’s试剂：

35 g碘化钾和1.3 g氯化汞溶解于70 mL水中，加入30 mL的氢氧化钾试液

2.2实验仪器

表2-1 实验仪器表

           仪器          厂商

BS110S电子分析天平    Sartorius公司

DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱 上海精宏实验设备有限公司

DNP-9052型电热恒温培养箱 上海精宏实验设备有限公司

Galanz WD700型微波炉  佛山市顺德区格兰仕电器有限公司

HYG-A全温摇瓶柜 太仓市实验设备厂

KQ-250E超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司

MLS-3020高压灭菌锅 SANYO Electric Co.,Ltd

MDF-382E超低温保存箱 SANYO Electric Co.,Ltd

TD5A-WS台式低速离心机 长沙湘仪仪器有限公司

THZ-C恒温振荡器 江苏太仓市实验设备厂

VS-840-1洁净工作台 上海博讯实业有限公司医疗设备厂

2.3 方法

2.3.1牛蒡根际放线菌的分离

土样的处理参照文献[8]，等到平板上出现较多单菌落时，在无菌操作台中挑取颜色、形态等性状不同的单菌落分别接种于ISP 2斜面上保存。

2.3.2菌株酪蛋白水解能力、几丁质水解能力的测定