（3）无水乙醇处理发酵液

 取冬青发酵原液1ml于小试管中,无水乙醇5ml于锥形瓶中，同时放到4℃冰箱中预冷1h,取出，两者混合搅拌均匀后取1ml于小试管内，置于-20℃冰箱中至少12h。分离方法同上pH法，并分别测定上清和沉淀的抗肿瘤活性。

（4）(NH4)2SO4分级盐析法处理发酵液[4]

取10ml冬青发酵原液，加入2.05g(NH4)2SO4，达到35%饱和度，在4℃冰箱内放置4小时，分装10根小试管中，离心方法同上pH法，取出上清液，然后将沉淀合并到一根小试管中，测定上清和沉淀的抗肿瘤生物活性。将上清液全部吸取至同一根试管中，加入去蒸馏水定容至10ml，再加入3.65g(NH4)2SO4，达到85%饱和度，在4℃环境下放置4小时，分装10根小试管内，离心方法同上，沉淀合并到一根小试管内，仅仅测定其沉淀生物活性。

1.2.4溶媒萃取试验[5]

    萃取溶剂选择乙酸乙酯、四氯化碳、氯仿、苯、正丁醇，各取5ml于5个小勺杯中，在分别加入冬青发酵原液1ml，均匀混合后，打开磁力搅拌器，搅拌1小时即可，装于分液漏斗内，静置24h等待分层，保留萃取液和萃取余液，然后测定其抗肿瘤活性。