将带有目的质粒的菌液，4000 rpm离心15 min，弃上清，收集菌体；

加入250 ul的Buffer P1(已加入RNaseA)，用涡旋仪使沉淀彻底重新悬浮混匀，转入新的1.5 ml离心管中；

加入250 ul的Buffer P2，温和的上下翻转4-6次，使菌液充分裂解混合，直至形成透明的溶液。此步骤反应时间不宜超过5 min；

加入350 ul的Buffer P3，立即温和的上下翻转6-7次，出现白色沉淀后，13000 rpm离心5 min，立即取出并且上下混匀，1300 rpm再离心5 min；

取出离心后的上清至硅胶吸附柱AC中，1300 rpm离心1 min，再重复一次；

倒废液，500 ul的PE洗脱液（带有乙醇），1200 rpm离心1 min；

倒出废液，250 ul的PE洗脱液（带有乙醇），1200 rpm离心1 min；

弃废液，13000 rpm空离2 min；

将吸附柱AC置于新的1.5 ml的离心管中，悬空加入100ul的BufferEB至吸附柱中，室温下静置2 min；

12000 rpm离心1 min洗脱，加入100ul的ddH2O

12000 rpm离心1 min，弃柱，测浓度。