1。2。3 三叶青无菌苗接种内生真菌 7

1。2。4 三叶青扩展蛋白基因相对表达含量的测定 7

1。2。5 三叶青总黄酮含量的测定 9

2  结果与分析 10

2。1 内生真菌的分离与鉴定 10

2。2 三叶青无菌苗的获得 11

2。3 内生真菌对三叶青生长发育的影响 11

2。4 不同处理三叶青中扩展蛋白基因相对表达含量的测定 12

2。5 不同处理三叶青中总黄酮含量的分析 13

3  讨论 15

参考文献： 16

致谢 17

引言

三叶青是一种珍稀的药用植物，因其块根形似葫芦又名为金线吊葫芦、金钱吊葫芦等。三叶青常以块根或是全草入药，民间用其治疗高热和肿瘤历史悠久。目前已经从三叶青的叶和块根中分离出多种化学成分，主要有黄酮类如槲皮素、山柰酚及三萜类化合物如蒲公英萜醇等。大量的药理实验证明三叶青具有抗肿瘤、保肝、抗病毒、抗炎、调节免疫作用等药理作用，并且基本无毒[1]。可见，三叶青是具有较高价值的药用植物。然而由于近年来对三叶青的需求量日益增加，野生三叶青被滥采、滥挖的现象日趋严重。再加上三叶青对生长环境的要求较为苛刻：需在海拔700 m的深山密林和悬崖峭壁的背阴面，上面要有散射光，旁边要有细水渗出，下面要有树叶覆盖，气温保持在18℃左右。现仅在浙江、广西、江西等山区有少量的自然分布[2]。野生三叶青资源正日益减少，现代生物技术成为了保护和利用三叶青的最有效手段之一。本研究目的是探究三叶青三叶青块根中内生真菌对三叶青生长发育以及药用化学成分的影响。论文网

1993年，Stierle et al。报道从短叶红豆杉韧皮部分离得到的内生真菌Taxomyces andreanae能产生具有抗肿瘤作用的化合物紫杉醇（Taxol）[3]。这一研究发现为对药用植物资源的保护和利用开启了新的大门，并引起了各界对内生真菌的广泛关注。植物内生真菌指的是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌。这类真菌很少形成孢子或形成不易观察识别的孢子。与病原菌不同，这类真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。在过去20年里，已经有超过100种植物的内生真菌被分离、培养并进行深入的化学成分和药理活性研究。例如吴剑丙等人通过对实验室收集保存的25种野生兰科植物进行菌根内生真菌的分离、鉴定和种类研究，为兰科植物的快速繁殖和快速生长技术提供可靠的理论依据和有益的菌根真菌[4]。邢朝斌等分析内生真菌对刺五加中刺五加苷B、E含量的影响，发现刺五加内生真菌可通过产生的代谢物调节刺五加苷B、E的含量[5]。 

扩展蛋白基因（expansins gene）是一个相对保守的基因家族，由α、β、γ和δ 4个亚家族组成。扩展蛋白存在于植物细胞壁，是一类能使植物细胞壁舒张的细胞壁活性蛋白，其普遍存在于正在生长的植物组织和成熟的果实之中。随着此基因克隆和相关研究分析的不断深入，发现扩展蛋白超级家族中的成员参与了植物体整个生长发育过程，种子的萌发，根毛的生长，茎叶的发育，花粉管的延长，叶柄脱落和果实的软化成熟等。除此之外，研究发现扩展蛋白与植物的抗逆性也有一定的联系。在本次研究中，通过荧光定量PCR技术测定真菌处理的三叶青中扩展蛋白的相对表达含量，来探究三叶青内生真菌对三叶青生长发育的影响以及对三叶青药用成分的影响。