根据文献报道，全局调控和局部调控的双重阻遏效应经常性会影响乳杆菌的糖代谢。局部调控是局部阻遏蛋白在没有诱导物存在的时候，和操作基因相结合使结构基因不能正常转录；诱导物存在时，阻遏物与之结合，阻遏物从操纵基因上脱离，启动子和操作基因使RNA聚合酶能够正常转录。发现了有一个基因SacR2编码GalR-LacI家族类型的调控阻遏蛋白。此基因的结构域里，N 端有典型的GalR-LacI家族同DNA相结合的HTH结构（IPR000843），C端则有同糖相结合的保守域（IPR028082）。相应的是，在基因簇中发现了潜在的Cre位点和专一性的操纵基因。对sacPTS1基因簇来说，在sacA和sacPTS1的启动子区域各发现一个操纵基因位点，在sacK基因的启动子区域则发现了一个Cre位点。以上结果表明，ST-III对FOS的利用应该是受到了双重阻遏效应，然而它的详细机制任然需要深入的研究。文献综述

2。 材料与方法

2。1菌种、培养基与试剂以及配置方法

2。1。1菌种

菌株/质粒 相关特性 来源

L。bplantarum ST-III 具有良好的利用FOS的能力，SacR2基因的宿主来源 CGMCC0874

E。coli DH5α  克隆宿主 Promega公司

E。coli BL21（DE3） 表达宿主 Novagen公司

pTolo-Ex5 　含有一个提高可溶性蛋白表达量的SUMO标签 上海吐露港生物科技有限公司

2。1。2引物

表2。1实验引物

引物

上游（SacR2F） 

5’AAGGCCTACGTCGACGAGGGCC

AATGAAACC来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*TTAAATG  3’

下游（SacR2R） 5’GCGGCCGCACTAGTTGAGGTTA

CGCGGTAAGGCCCTTG  3’

2。1。3培养基及样品

TRYPTONE、YEAST EXTRACT等购于OXOID；琼脂粉在上海中科昆虫生物技术开发有限公司购买；双蒸水由应用技术大学自制；氯化钠购于江苏强盛功能化学股份有限公司；抗生素类、EDTA、琼脂糖H、Tris、甘氨酸、十二烷基硫酸钠(SDS)、细菌基因组DNA快速抽提试剂盒、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒、SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒、4S Red Plus Nucleic Acid Stain等均购于生工生物工程(上海)有限公司；SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、IPTG购于康为世纪生物科技有限公司；10x loading buffer、DL10000 marker购于宝生物工程(大连)有限公司；无水乙醇购于上海泰坦科技股份有限公司；快速质粒小提试剂盒、2xProtein Loading Buffer购于天根生化科技有限公司；Ezmax One-Step Cloning Kit购自于上海吐露港生物科技有限公司。

2。1。4试剂配置方法

SOC培养基：称取YEAST EXTRACT 5g，氯化钠5g，TRYPTONE 20g， 1mol/L 氯化镁10mL，1mol/L 氯化钾2。5mL， 1摩尔葡萄糖溶液20mL，放入1000mL玻璃容器中，加入900mL的去离子水，用水补足体积到1L，高温灭菌。

LB液体培养基：称取TRYPTONE10g，氯化钠5g，YEAST EXTRACT 5g，放入1000mL玻璃容器中，加入900mL的去离子水，用氢氧化钠溶液(约1mL)调整pH值至7。0，再补足水至1L。

LB琼脂培养基：称取TRYPTONE10g，YEAST EXTRACT5g，琼脂粉12g，氯化钠5g放入1000mL玻璃容器中，加入900mL的去离子水，用氢氧化钠溶液(约1mL)调整pH值至7。0，再补足水至1L。