摘要：纤维素是自然界分布最广，含量最丰富的可再生资源，降解其最有效的酶为纤维素酶。β-葡萄糖苷酶是里氏木霉纤维素酶的重要组成部分，它能够水解纤维二糖和纤维糊精，水解产物为葡萄糖分子，广泛应用于食品、医用、纤维素降解等领域。为了提高纤维素酶的表达效率，降低生产生物燃料所需纤维素酶制剂的成本，本论文以里氏木霉的基因组DNA为模板，根据β-葡萄糖苷酶cel3c基因序列，设计特异性引物，进行PCR扩增，获得预期大小的目的片段，将其与载体连接，提取质粒并测序，实现β-葡萄糖苷酶cel3c的克隆。76763

毕业论文关键字：里氏木霉，β-葡萄糖苷酶cel3c，基因克隆

Abstract：Cellulose is the most widely distributed and abundant renewable resource in nature。 The most efficient enzyme to degrade cellulose is cellulase。β-glucosidase is an important part of cellulase in Trichoderma reesei, which can hydrolyze cellobiose and fiber dextrin to glucose。 It is widely used in the field such as food industry, pharmaceutical industry and cellulose-degarding company。 Therefore, in order to improve the efficiency of the expression of cellulase and reduce the cost of the cellulase enzyme preparation used for the production of biofuels, this thesis uses the genome DNA of Trichoderma reesei as template。 According to the gene sequences of β-glucosidase cel3c, Polymerase Chain Reaction was performed to obtain the expected size of the target fragment by designing specific primers。 The amplified fragment by PCR was then ligated to a vector。 The cloning of β-glucosidase cel3c was then confirmed by DNA sequencing。

Keywords: Trichoderma reesei, β-glucosidase cel3c, gene cloning

目录

1 前言 6

1。1 研究背景 6

1。2 纤维素酶的类型 6

1。3 纤维素酶的产生菌种 6

1。4 β-葡萄糖苷酶 7

1。4。1 β-葡萄糖苷酶的结构和功能 7

1。4。2 β-葡萄糖苷酶的基因工程研究进展 7

2  材料与方法 8

2。1  实验材料 8

2。1。1  菌株与质粒 8

2。1。2  主要试剂及培养基 8

2。1。3  琼脂糖凝胶的制备 8

2。2 方法 8

2。2。1  目的基因cel3c和启动子Pact的扩增 9

2。2。2  重叠PCR连接cel3c与Pact(Pact-cel3c） 11

2。2。3  Pact-cel3c-与载体（pCAMBIA-1300）的连接 11

2。2。4  重组子导入大肠杆菌感受态细胞 12

2。2。5 重组子的酶切 12

2。2。6  cel3c基因的序列测定 12

3。1  cel3c的PCR扩增 12

3。2 Pact的PCR扩增 13

3。3  Pact-cel3c的PCR扩增 13

3。4  Pact-cel3c的酶切 14

3。5  pCAMBIA-1300 DNA片段的酶切