摘  要   由于里氏木霉产纤维素酶量高、稳定性好、适应性强、并且可以通过物理和化学诱变获取高产菌株，便于生产和管理，因此研究和利用价值突出。我国对β-葡萄糖甘酶基因方面的研究已有较长历史，目前为止已有上百个微生物β-葡萄糖甘酶得到克隆，早期是通过构建总DNA文库进行活性筛选的方式对β-葡萄糖甘酶基因进行克隆。随着PCR技术的应用，利用种属相似性扩增克隆得到许多β-葡萄糖甘酶基因。随着基因组学的发展，越来越多的微生物基因组全序列被测定，通过序列筛查定位分析出可能的β-葡萄糖甘酶基因，是获得β-葡萄糖甘酶新基因的有效手段。本文主要运用PCR扩增技术对里氏木霉中β-葡萄糖甘酶Bgla进行克隆，并为里氏木霉纤维素酶的表达及其酶活的影响做铺垫。77990

毕业论文关键词 : 里氏木霉，β-葡萄糖甘酶，克隆

Abstract   Because of its high yield of producing cellulase, good stability, high adaptability, and can obtain higher yield strains by physical and chemical mutagenesis, easy to obtain and manage, Trichoderma reesei has outstanding research and utilization value。 Research on β-glucosidase has a long history in China。 About a hundreds of β-glucosidases have been cloned from different microbes。 Previously, β-glucosidases was cloned by activity screening from cloned genome library。 With the application of PCR technology, many β-glucosidases were amplified and cloned by the gene similarity。 With the development of genomics, more and more microbial genomes have been sequenced, and the β-glucosidase genes can be effectively obtained through sequencing screening and analysis。 This thesis has successfully cloned β-glucosidases Bgla from Trichoderma reesei using PCR amplification technique, to pave the way for study its effect on the expression and activity of cellulase。 

Key words :  Trichoderma reesei, β- glucose, clone

目录

1。 前言 4

1。1 研究背景 4

1。2 文献综述 4

1。2。1 里氏木霉及其纤维素酶 4

1。2。2 β-葡萄糖苷酶及应用 5

2。实验方法 5

2。1实验材料 5

2。1。1菌种制备 5

2。1。2 质粒与载体 5

2。1。3培养基 5

2。1。4琼脂糖凝胶的配制 6

2。1。5主要试剂及实验器材 6

2。2实验方法 6

2。2。1 启动子（Pact）与目的基因(Bgla)的扩增 7

2。2。2  Pact-Bgla与载体（pCAMBIA-1300）连接（Pact-Bgla -pCAMBIA -1300） 9

2。2。3 重组子的转化与鉴定 10

3  结果与分析 10

3。1  Bgla的PCR扩增 10

3。2  Pact的PCR扩增 11

3。3  Pact-Bgla的PCR扩增 11

3。4  Pact-Bgla的酶切 12

3。5  质粒DNA片段的酶切 12

3。6重组子的重组与转化