双酚A对大豆种子萌发及幼苗生长的影响(3)
叶绿素a、b在95%乙醇中最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，可据此列出以下关系式:
Ca=13.9D665-6.88D649
Cb=24.69D649-7.32D665
有公式算出叶绿素含量。
1、分别取每个处理的大豆幼苗叶片，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉）混匀，称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
2、取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
3、用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。
4、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。
5、按公式分别计算叶绿素a、b的浓度（mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：
叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重
3.数据处理
试验所测数据采用Microsoft Excel2003进行基本统计并作图，然后用SPSS或DPS软件进行方差分析。
4.结果
4.1大豆种子发芽数
每天上午九点定时测定种子发芽数，统计后加入适量相对应的双酚A溶液后放入恒温箱。从第三天开始大豆种子开始萌发，至第优尔天萌发率达到最大值。双酚A对大豆种子萌发的影响试验结果(表1)表明,当BPA浓度为100mg/L时，大豆种子变黑不能萌发；BPA浓度50mg/L时,大豆种子发黑发芽率受到抑制；BPA浓度20mg/L时,大豆种子发芽率受到抑制；BPA浓度大于1mg/L时,对大豆的发芽率有促进作用。
表1大豆种子萌发率
BPA浓度
（mg/L） 徐黄13（平均发芽个数） 中黄33（发芽个数）
3d 4d 5d 6d 3d 4d 5d 6d
0 16 42 68 100 14 52 72 100
5 14 54 74 100 56 76 84 100
20 12 48 66 92 26 54 80 96
50 0 40 64 88 0 36 72 90
表2种子发芽势（%）与发芽率(%)
BPA浓度 徐黄13 中黄33
发芽势 发芽率 发芽势 发芽率
0 16 100 14 100
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