1.1.3 酶及生化试剂
(1)抗生素:氨苄青霉素(Ampicillin)和氯霉素(Chloramphenicol)购自生工生物工程有限公司。
(2)生化试剂:胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂粉、琼脂糖、七叶苷、柠檬酸铁铵、乙醇、考马斯亮蓝 (R-250)、盐酸、氢氧化钠、冰乙酸、咪唑及其它试剂均为国产分析纯,购自南京寿德实验器材有限公司。三羟甲基氨甲烷(Tris-base)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、十二烷基硫酸钠(SDS)、 TEMED、过硫酸铵、30%丙烯酰胺、均购自国药集团。
(3)质粒提取试剂盒、琼脂糖凝胶回收试剂盒,购自于天根有限公司;、改良型Bradford法蛋白浓度测定试剂盒购自生工生物工程有限公司;
(4)连接酶T4 Ligase,内切酶Sau3AI、BamHI、NdeⅠ、XhoⅠ等,购自赛默飞世尔科技有限公司
(5)DNA marker,购自捷瑞生物工程有限公司
1.1.4菌株和载体
亚克隆菌株:E.coli EPI100-T1R
亚克隆载体:pWEB-TNC (本实验室去磷酸化保存)
克隆载体:pTG-19Tvector
表达载体:pET-30a(+) 由本实验室课题组经双酶切、去磷酸化处理后保存。
表达宿主:E.coli BL21 (DE3)
1.1.5 实验仪器
精密天平:FA2004N型(上海民桥精密科学仪器有限公司立式压力蒸汽灭菌锅):LDZM-40KOS(上海申安医疗器械厂);实验室水纯化系统:Master-SUV型(上海和泰有限公司);电热恒温培养箱:DNP-9162型(上海精宏实验设备有限公司);洁净工作台:8w-CJ-IFD型(广州益智仁电子科技有限责任公司);离心机:1-14型(Sartorius AG),CT15RT高速冷冻离心机(上海天美公司);摇床:HYG-C型(太仓实验设备厂);电泳系统:稳压稳流电泳仪DYY-6C(北京优尔一仪器厂);凝胶成像系统:Gelx1520(上海欧翔科学仪器有限公司);电击仪:micro pluser电击仪(Bio Rad公司);梯度 PCR 仪:Hema 9600(珠海黑马医学仪器有限公司);−80 °C 超低温冰箱WUF-400(DAHAN科学仪器有限公司);细胞破碎仪(上海思伯明公司VCX750 Sonics细胞破碎仪)。
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