共轭亚油酸异构酶基因原核表达系统的构建(2)

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2.3 结果与讨论 14

2.3.1亚油酸异构酶 PAI 的 SDS-PAGE 凝胶电泳检测结果 14

2.3.2定性实验—底物是由重组酶转移催化生成共轭亚油酸 14

2.3.3 GC-MS 检测结果 14

第三章结论 15

第四章展望 15

参考文献： 15

前言

1.1共轭亚油酸

共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一类在9与10、10与12或11与13位碳原子处含有顺式或反式共轭双键的十八碳二烯酸。因为顺反构象和双键所在位置的差异，存在着8-10 , 9-11，10-12，11-13等几种异构体，目前，对于cis-9，trans-11-CLA 和 trans-10，cis-12-CLA这两种异构体的研究相对较多，且这两种异构体已经被证明对人体具有较大的生理活性，在本文中主要探讨的研究对象是trans-10，cis-12-CLA。在人类的日常饮食生活中，天然的共轭亚油酸存在于一些反刍动物牛羊的肉与中，由于反刍动物体内的丁酸弧菌亚油酸异构酶可以将LA催化生成CLA[2]。美国食品与药物管理局推荐的共轭亚油酸每日摄入量在3g~7g之间，然而天然共轭亚油酸在食物中所占比率是微乎其微的。一般植物油例如大麻油、棉籽油、大豆油等每克只有 0.1mg~0.7 mg。即便在乳脂中CLA的平均含量仅为3- 7 mg/g；牛肉脂肪中只有3-4 mg/g[3]。因此，在自然界中天然的共轭亚油酸含量甚少，尤其是单一的异构体，我们需要开辟新的合成方法来大量生产。

1.2 共轭亚油酸的主要生理功能

共轭亚油酸在生物体中起着至关重要的生理作用，逐渐在食品和医药等研究领域引发极大的关注热潮。如：减肥、抗氧化与改善肉质、增强免调节能力、降低肿瘤发病率、降低血液和肝脏胆固醇等[4] [5]。之后长达几十年里，研究人员开展了对CLA的进一步研究，主要从动物实验结果和人类志愿者的临床案例双管齐下。实验发现含有CLA异构体混合物或单一异构体能抑制实验动物胃、乳腺、结肠及前列腺等部位肿瘤的发生率 [6]。在各项试验研究里，降低体内脂肪沉淀与减少肿瘤发病率的研究较为深入且实际案例较多。可喜的是，研究人员将关注点慢慢集中在不同纯净的CLA异构体的生理功能上，不再局限于原有包括了几种不同CLA异构体混合物的研究中。随着科学技术的迅速发展，不同CLA异构体之间的独特的生理活性与功能也被区别开。例如trans-10,cis-12CLA在控制体脂率就发挥着极大的作用，日本已经利用这种特殊活性推出了以trans-10,cis-12CLA为主要活性成分的保健品。

1.2.1 减少机体脂质的积累及作用机制

在Park的实验中发现小鼠体内的脂肪含量由于trans-10,cis-12CLA摄入的增加而产生明显变化[7] [8]。之后在Pariza[9]的研究中显示trans-10,cis-12 CLA可以抑制生物体内脂肪的增加，trans-10,cis-12CLA主要是通过抑制脂肪细胞脂蛋白脂肪酶的活性从而降低体脂而非阻碍脂肪细胞摄取油脂含量[10] [11]，另一方面又能够增加对脂肪酸的氧化减少胆固醇的积累[12]。这些都表明了trans-10,cis-12CLA可以大大降低脂肪细胞的成熟与分化程度并抑制机体脂肪的增加从而达到了降低体脂的效果，这对于高胆固醇人群是一项十分有利的研究。

经过人类志愿者的临床实验结果分析显示：人体摄取含有c-9,t-11CLA 和 t-10,c-12CLA的化合物大概需要4周以上的时间才会消耗体内多余的脂肪含量；相同情况之下，摄取trans-10,cis-12CLA的纯合体便可以在一周以内使机体脂肪含量适当的降低。几年来，在一些临床试验中进一步的发现低生理浓度的cis-9,trans-12CLA与trans-10,cis-12CLA对于人类体脂含量的影响是截然不同的。cis-9,trans-12CLA导致甘油三酯增加并且会增加肥胖的男人患心脑血管疾病的几率[14] [15]。综合研究可见，两种异构体在减少机体脂质的功能上存在着巨大差异。trans-10，cis-12-CLA 能够降低脂肪含量，相反的，cis-9，trans-11-CLA 会在一定程度上增加甘油三酯而使得脂肪含量增加。因此，为了更好地研究和利用 CLA的生物活性，让CLA异构单体发挥其各自独特的功能特性，合成高纯度的 CLA 单体势在必行。