下面将对这三类常见的毒力因子进行展开性描述:
1.聚合物和肠球菌表面蛋白。聚合物是分布在细胞表面的一种具有粘附作用的细菌表面蛋白。在动物实验中,Chow[8]等发现,已经被感染的小兔体内的聚合物含量明显上升。但是聚合物往往跟细胞溶素(另一种毒力因子)一起在动物体内表达,才会增加死亡率。这表明在感染的过程中,不能缺少起到粘连作用的聚合物,所以这两个毒力因子缺少任一个都不能导致小兔的患病。肠球菌表面蛋白是由esp基因组成的高分子量表面蛋白,在关于肠球菌表面蛋白的研究中,不同的学者通过研究esp基因与生物膜的形成之间的关系来确定肠球菌蛋白的功能机理,但是目前来说没有确切的实验数据来证明,但是可以确定的一点就是肠球菌表面蛋白是一种毒力因子,在肠球菌感染致病过程中也发挥了作用。
2.细胞溶素和明胶酶。细胞溶素是肠球菌中具有毒性的一个重要因素[8]。关于细胞溶素的与肠球菌毒性的关系,我们已在很多的动物模型中得到了证实。如细胞溶素能够提高小鼠腹腔感染到约100倍;对兔子的视网膜和其他眼部结构造成严重破坏,使得抗生素的治疗效果不佳;还能提高人菌血症感染致死率约5倍。所以得出细胞溶素是一种毒素。明胶酶是一种分泌型蛋白酶,主要是参与生物膜的合成,通过降解宿主体内的重要物质来破坏机体的免疫系统,使机体感染。源:自*优尔`%论,文'网·www.youerw.com/
3.过氧化氢调节因子和荚膜多糖。肠球菌本身会通过产生蛋白酶来减少机体内的巨噬细胞或者中性粒细胞对其的免疫作用[9]。过氧化氢调节因子主要是在此过程中帮助肠球菌抵抗机体的免疫系统,并提高其在机体内的存活率和致病率。荚膜多糖一般由糖和多肽组成,为细胞壁外的一层粘液性组织,可保护微生物免受机体免疫系统的识别和清除,提高其在宿主体内的存活率。
在本研究中,从孔雀粪便中筛选出具有抑菌活性的肠球菌菌株,通过16S rRNA基因测序来鉴定该菌,通过药敏性试验分析该菌的耐药性,利用PCR技术,研究该菌是否具有常见的毒力基因,并对该菌株的安全性进行了评价和总结,以期获得具有应用价值和安全保障的肠球菌,为开发新型微生物制剂提供理论依据。
1材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 菌株
从孔雀粪便中筛选到的一种具有优良抑菌活性的肠球菌KQ 2.6。
1.1.2培养基、试剂与仪器
培养基:MRS基础培养基用于乳酸菌的培养和筛选,LB培养基用于一般细菌的培养,MRS培养基、LB培养基均按照相应参考文献[10-14]进行配制,高压灭菌后保存于4 ℃冰箱备用。
试剂:30%(V / V)甘油、EB(溴化乙锭)、50×核酸电泳缓冲液(TAE)、95 %乙醇、PCR预混液(Taq PCR StarMix)、氢氧化钠、盐酸、Tris-HCl(1.5 M,pH 8.8)等。
主要实验仪器:电子天平;纯水制备系统;立式压力蒸汽灭菌锅;紫外线无菌操作台;HZ-9311KS卧式恒温恒湿振荡器;722型分光光度计;DNP-9272型恒温培养箱;电热恒温水槽;BCD-179KT型冰箱;TGL-16G 高速台式离心机;Sanyo制冰机;PCR仪;电泳仪;解剖刀;PC-603自动测定仪;光学显微镜等。
1.1.3抗生素
该实验中所用的九种圆形药敏滤纸片,分别含有氨苄青霉素、氯霉素、四环素、红霉素、环丙沙星、链霉素、庆大霉素、青霉素、万古霉素这九种抗生素。