一次性培养皿（BECTON DICKINSON, USA）

胰酶（AMRESCO分装）RPMI 1640培养粉（INVITROGEN）

5mol/L EDTA（实验室提供） 文献综述

胎牛血清（Gibco公司） 二甲基亚砜（DMSO）（AMRESCO分装）

PBS （磷酸缓冲液）

2。1。3试剂

2。1。3。1  0。25%胰酶消化液（50ml）

（1）、从实验室取出0。5mol/L EDTA和0。5%胰酶原液放置于室温下解冻

      （2）、从实验室取出25mL的0。5%胰酶原液和24ml的1×PBS以及1mL的0。25mol/L EDTA。

     （3）、将上述步骤中所取液体充分混匀后取2mL做无菌试验，保存于4℃环境中备用。

2。1。3。2 细胞培养液

RPMI-1640原液：

（1）准备一个1000ml烧杯，称取10。4克1640粉一袋，放入1000ml的烧杯中加入800mL三蒸水，在磁力搅拌器上搅拌4小时

（2）等待其充分溶解后，向其中加入2g碳酸氢钠，继续搅拌1h，定容至1000ml，用1M HCL将PH值调节到7。1-7。2

（3）加庆大霉素（按1ml培养液加2ul庆大霉素）。

（4）抽虑灭菌后取出3mL于小瓶中，在37℃温箱培养做无菌试验。

（5）将原液放在4℃保存。

1640应用液：

（1） 将灭活的胎牛血清置于4℃的水浴中融化。

（2） 取出10取1640原液，加入10%的胎牛血清，做无菌试验。

（3） 将试剂放在4℃保存。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

2。1。3。3 PBS缓冲液

10× PBS储存液：

（1） 称取80。0g的NACL、2。0g的KCL、28。9g的Na2HPO4·12H2O、2。0g的NaH2PO4 于烧杯中。

（2） 加入DDW，用量筒定容至1000ml。

1×PBS应用液：

（1） 将已配置好的10× PBS储存液稀释10倍。

（2） 在高压灭菌锅内灭菌，留作细胞培养用。

2。1。3。4 BTH（抗氧化剂二丁基羟基甲苯 ）

（1）称取20mg的DPPH。

   （2）向其中加入乙醇使其溶解。

   （3）用250ml的容量瓶定容。

（4）放置−20 ℃冰箱中保存备用