1。2。2总糖含量测定

采用蒽酮-硫酸法测定紫苏粗多糖中总糖含量．依次吸取120μg/mL葡萄糖溶液0、0。1、0。2、0。4、0。5、0。6、0。8和1mL，分别以超纯水补充体积至1mL，混匀后置于冰浴中，再分别加入5mL 10mg/mL蒽酮溶液（浓硫酸配制），混匀后置于96℃水浴中，准确加热3min，取出后迅速置于冰浴中冷却20min，至室温后测定OD620。横坐标为葡萄糖溶液浓度（μg/mL），纵坐标为吸光度OD620，绘制总糖标准曲线。

准确称取紫苏粗多糖5mg，用超纯水充分溶解至50mL，取1mL按上述相同方法测定OD620，代入总糖标准曲线方程，求出粗多糖中总糖含量。

1。2。3清除羟基自由基测定

采用邻二氮菲-Fe2+氧化法[23]。

（1）将1。0 mL 5 mmol/L邻二氮菲溶液，3。8 mL PBS缓冲液（pH 7。4）和1。0 mL不同浓度的紫苏多糖溶液加入反应小瓶中，用枪头充分混匀；

（2）向上述小瓶中加1。5 mL 5 mmol/L硫酸亚铁溶液，充分混匀；

（3）继续加1。0 mL浓度为0。1%的过氧化氢溶液，加水至10 mL，37 ℃水浴中保持30 min；

（4）将上述反应液在536 nm下测定吸光度，为A样；按上述操作，不加双氧水处理为未损伤管，为A未损；不加紫苏多糖溶液为损伤管，为A损。以抗氧化剂Vc为阳性对照。按下式计算•OH清除率：

•OH清除率(%)=(A样品-A损伤)/(A未损-A损伤)×100

1。2。4超氧阴离子自由基（O2-）的清除测定

采用邻苯三酚自氧化法[24]。

（1）将6。0 mL pH 8。2的Tris-HCl缓冲液（0。05 mol/L ）和1。0 mL不同浓度紫苏多糖检测液加入反应小瓶中，同时用蒸馏水1。0 mL代替空白管，混匀后25 ℃保持25 min。

（2）向上述反应液中继续添加1。0 mL邻苯三酚溶液（8 mmol/L），充分混匀，准确反应4 min后，滴加两滴浓HCl以终止反应，325nm测定吸光度。

（3）配置一定浓度的Vc做阳性对照，并按下列公式进行计算:来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

     O2-清除率/%=（A -A ）/A ×100

1。2。5亚硝酸盐（NO2-）清除能力的测定

采用盐酸萘乙二胺法[25]测定。

（1）将3。0 mL 5μg/mL的亚硝酸钠，5。0 mL pH 3。0 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液和2。0 mL不同浓度的紫苏多糖溶液依次加入到反应小瓶中，用枪头充分混匀；

（2）37℃水浴锅中处理 15min，取出后立即加入2mL 0。4%对氨基苯磺酸，摇匀，静置3-5min；（3）加入1。0 mL 0。2%盐酸萘乙二胺，混匀，静置15 min，波长538 nm测定吸光度。分别以相应浓度样液做空白试验。选用Vc作为阳性对照。