超声波辅助提取法(UAE)利用了强力超声的溶剂萃取方法,它在低温低压就可完成,具有快速、简便、价廉、高效等优点。
C。微波辅助提取法(MAE)
微波辅助提取法(MAE)利用微波作为不连续热源与索氏抽提联用的技术,克服了索氏提取萃取时间较长、溶剂消耗大等缺点,并且能有效加热、增加提取效率、简化步骤。
D。加压液体萃取技术(PLE)
加压液体萃取技术(PLE)是将固体样品在高压下用有机溶剂提取的方法,与传统的分析方法比较,PLE提取时间短、提取率高、溶剂用量少,并且自动化,可以尽量避免人体直接接触溶剂。
3 脂肪酸的衍生方法
本节简要介绍了不同的脂肪酸衍生的方法,尤其在气相色谱中应用的衍生化方法,叙述了脂肪酸衍生的原因、衍生的作用、衍生化试剂以及不同衍生方法的作用特点,还着重介绍了最常用的脂肪酸衍生方法——脂肪酸甲酯化,以及较为特别的硅烷化方法。
(1)脂肪酸衍生方法概述
本部分主要对脂肪酸衍生化的原因、作用、方法、特点等方面进行简要的介绍和梳理。
A。衍生化的原因
采用气相色谱法分析脂肪酸,一般需要进行衍生化处理。其原因是脂肪酸甘油酯及其脂肪酸的具有非常强的极性、热敏性,在高温条件下不稳定,容易发生副反应,使得定量困难;还具有高沸点,如果直接进行气相色谱分析,需要很高的柱温,造成固定性难以选择,色谱拖尾、保留时间不重复和假峰等现象。因此,脂肪酸的气相色谱分析,需要进行衍生的前处理过程。
B。衍生化的作用
衍生技术可以提高目标分析物的热稳定性和挥发性,使分析灵敏度和选择性提高,改善色谱行为的保留时间分离度和色谱峰的对称性,可以起到阻止样品和色谱柱两者发生反应,这些优点使得衍生化技术更广泛同于色谱分析中。由此,不同样品应该如何选择衍生化方法和试剂,如何优化衍生化的反应条件,如何提高衍生化的选择性和稳定性,如何简化衍生的步骤等,这些条件和方法的筛选都对样品的快速、灵敏、高选择性的分析具有重要的意义。
C。衍生化的方法和试剂
生物样品中脂肪酸的气相色谱的衍生化方法,可大致分为烷化(包含酯化)、硅烷化、胺化三类。烷化试剂主要有有烷基卤代物、重氮烷烃、酯化试剂等;酯化试剂包括五氟苄基酯化试剂、硫酸-甲醇试剂、三氟化硼-甲醇试剂、氢氧化钾-甲醇等;硅烷化试剂有三甲基硅烷、N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺和N-O-双(三甲基硅基)三氟乙酰胺;胺化主要涉及二甲胺和双(2-甲氧基-乙基)胺三氟化硫试剂两种试剂。卫阳飞等[5]就此对不同生样品中(组织、血液等样本)的脂肪酸分析做了较为全面的概述。
D。不同衍生方法的特点
衍生化试剂种类繁多,且不同衍生化试剂有他们各自的特点,总的来说常用的衍生化试剂中,硅烷化试剂会与含活泼氢的物质发生反应,适用于游离脂肪酸的分析;三甲基硅重氮甲烷法也仅适用于样品中游离态脂肪酸甲酯化分析;酸催化甲酯化,如硫酸-甲醇法,既适用于酯化游离脂肪酸,也适用于酯化脂肪;碱催化甲酯化,如氢氧化钠-甲醇法,只适合酯化脂肪不适合酯化游离脂肪酸;三氟化硼-甲醇法、乙酰氯-甲醇法可以实现样品中酯化和非酯化脂肪酸的甲酯化。
黄峥等[6]采用五种方法对花生油中的脂肪酸进行分析,分别为三甲基硅重氮甲烷法(TMS-DZM)、硫酸-甲醇法、氢氧化钠-甲醇法、三氟化硼-甲醇法、乙酰氯-甲醇法。发现TMS-DZM 法所测得的峰面积最小,仅测出极少量的脂肪酸,硫酸-甲醇法与三氟化硼-甲醇法具有相似的甲酯化效率,乙酰氯-甲醇法的脂肪酸提取效率最高。