(2)脂肪酸甲酯化

    本部分主要对脂肪酸甲酯化的原理、作用、方法及其试剂进行介绍，并针对近年来常用的酸法、碱法、三氟化硼-甲醇法和重氮甲烷进行介绍。

A。甲酯化的原理和作用

脂肪酸的酯化主要有甲酯化和乙酯化，一般C5以下的脂肪酸可衍生为乙酯，丙酯或苯甲酯，C6以上的脂肪酸转变为甲酯，有报道测定EPA和DHA的含量时用到乙酯化的方法，因此，绝大多数的脂肪酸都用甲酯化方法来衍生。

   脂肪酸甲酯化是将沸点高、不易挥发和气化的脂肪酸酯先水解得到甘油和脂肪酸，使脂肪酸与甲醇反应生成相应的脂肪酸甲酯衍生物；另一种是油脂直接与甲醇发生醇解制取脂肪酸甲酯。这些生成的衍生物的沸点低、易挥发和气化， 可降低测定时的气化温度和提高分离效果，利于气相色谱的分离、脂肪酸的组成和含量的测定。

B。甲酯化的方法和试剂

脂肪酸的甲酯化方法很多，按处理样品种类分有脂肪酸、酰基甘油酯（甘油酯）、脂肪酸盐（肥皂）、脂肪酸酯（三酰基甘油酯、单酰基、二酰基甘油酯、乙二醇酯）等的甲酯化[7]；按处理方法分有酸法、碱法、三氟化硼-甲醇法、重氮甲烷法、简易碱式甲酯化方法、四甲基氢氧化铵法等。

以下简要介绍前四种甲酯化方法。

 酸法：常用的酸性催化剂有盐酸、硫酸，酸的浓度不是越高越好，过高可能引起双键结构的改变等副反应。酸法通常采用硫酸甲醇法，据统计，文献中出现的硫酸浓度分别有1％、2。5％、5％、10％、20％，甲酯化温度分别有60、70、80、90 ℃，甲酯化时间分别有 30、60、90、120 min[8]。既可处理血浆中的游离型脂肪酸，又可处理食品等中的甘油三酯型的脂肪酸，其适用范围非常广泛。

 碱法：常用的碱性催化剂有氢氧化钾、氢氧化钠和甲醇钠等，就氢氧化钾而言，其采用过的浓度有0。2、0。4、0。5、0。8、2。0、4。0 mol/L，甲酯化温度分别有 40、45、70 ℃，甲酯化时间分别有20、30、60 min[8]。主要分析包含甘油三酯型脂肪酸的样品，其甲酯化程度高，能取得较好的酯化效果；但碱催化甲酯化法不适合酯化游离型脂肪酸和酸价高于2的油脂，这是由于碱性催化剂与脂肪酸生成可溶性的脂肪酸盐类，不具有催化作用，且生成的脂肪酸盐难以转化为脂肪酸甲酯。

 三氟化硼-甲醇法：采用酸性的三氟化硼作为催化剂，属于酸法的一种，有时会先用碱中和非中性的游离脂肪酸，再用三氟化硼作为酸性催化剂的甲酯化的方法，该法加速了甲醇与油脂的醇解，使得油脂的甲酯化过程迅速，甲酯化更加完全。一般三氟化硼采用的浓度分别有 12。5％、14％、15％、30％，甲酯化温度分别有 60、75、100 ℃，甲酯化时间分别有2、10、30 min[8]。该法对酯化和非酯化的脂肪酸都可以甲酯化，但是存在很多的不足，其步骤繁琐、操作复杂、回收率低、溶液具有较强的毒性且容易挥发，加热时还容易生成毒性更大的氟化氢等有害物质，对人体潜在性的损伤非常大，这些弊端限制了该法的应用。

 重氮甲烷法：重氮甲烷甲酯化是活性较高的重氮甲烷在甲醇的催化下与脂肪酸反应生成脂肪酸甲酯，该法主要用于游离脂肪酸的甲酯化，其反应迅速，特别对多不饱和脂肪酸，且不发生副反应，但重氮甲烷具有剧毒，高浓度易燃爆，危险性较高，对操作者的操作要求很高。

不同的甲酯化试剂具有各自的特点，同一种甲酯化试剂的浓度、用量、甲酯化时间及其温度等反应条件不同都会对实验结果产生影响，因此，针对不同的样品和不同的脂肪酸种类应选用合适的脂肪酸甲酯化方法。