(3)脂肪酸硅烷化

脂肪酸硅烷化衍生物是脂肪酸羧基上活泼氢部分被硅烷基取代而生成的，在脂质提取物中除了含有游离脂肪酸外，还有一些糖类、固醇类等物质也会发生硅烷化，但是这些物质不影响游离脂肪酸的测定。硅烷化试剂的用量通常较少、选择性较高、灵敏度好、操作简便，可用于针对全谱分析的代谢组学研究。但是试剂遇水失效，因此反应条件必须无水，反应的产物也必须无水条件下储存，这在一定程度上限制了其应用。

李强等[9]采用 N，O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）硅烷化试剂对从冠心病患者的血清冻干粉末中提取的游离脂肪酸进行硅烷化，并采用气相色谱-质谱法测定，结果检测到了11 种游离脂肪酸，色谱峰完全分离，峰形良好，杂质干扰小，建立了具有高灵敏度和准确性、较宽线性范围、操作简便的游离脂肪酸分析方法。该作者还与N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺（MSTFA）硅烷化试剂做了比较，发现MSTFA反应产物对花生四烯酸和花生五烯酸的分离具有干扰，不利于气相色谱分析。

4 脂肪酸定量定性方法

本文对脂肪酸定量和定性的方法做了简要的概述，主要对气相色谱分析法和高效液相法两种经典的脂肪酸分析法，并且简要叙述其他常用的脂肪酸分析方法。

(1)方法概述

脂肪酸的测定方法有许多的方法，如ELISA试剂盒法、滴定法、比色法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、近红外光谱技术，核磁共振分析法和电泳法等分析方法。

目前临床上常用ELISA试剂盒来测定人体游离脂肪酸的水平，而滴定法和比色法只能测定脂肪酸的总量；薄层色谱法可以对中性脂质进行分离得到甘油酯和游离脂肪酸，常与气相色谱法联用。

气相色谱法和高效液相色谱法常常需要对样品前处理，使脂肪酸衍生化，提高检测的灵敏度、准确度、分离度、选择性，相较于气相色谱法，高效液相法可用来分析难挥发的物质，允许脂肪酸转化为不同的衍生物，但是由于气相色谱突出的的高灵敏度、高分离效率等优势，在脂肪酸的分析中应用更为广泛。

近年来，近红外光谱技术在脂肪酸的分析中得到广泛的应用，它具有不破坏样品、不消耗化学品试剂、高效快速等特点；毛细管电泳法可以在毛细管区带电泳模式只分析C1～C7 的游离脂肪酸，胶束电动力学毛细管色谱模式只分离 C8～C20 的游离脂肪酸。

(2)气相色谱法分析脂肪酸

气相色谱自身具有高灵敏度和高分离效果，在脂肪酸的分析中应用更为广泛，特别与质谱联用后，其鉴别能力得到了提高，可以用于复杂生物基质和未知混合物样品中各组分的定量和定性分析。师锦波等[10]对不同生理状态下的人体肝组织用盐酸-甲醇衍生化后进行气相色谱-质谱分析，测得人体正常肝组织含有9种以上的较为稳定的脂肪酸，分别为三癸烷酸（13:0）、肉豆蔻酸（14:0）、十五烷酸 （15:0）、棕榈酸（16:0）、棕榈油酸（16:1）、硬脂酸（18:0）、油酸（18:1）、亚油酸（18:2）和花生四烯酸油酸（20:4）。用气相色谱法分析脂肪酸的方法列于表1-1。

(3)高效液相法分析脂肪酸 

TLC是常用于分离脂质中的不同组分，但是该法较为费力，分辨率低，已造成较大的误差，而HPLC虽然具有较高的选择性和灵敏度，但是缺乏合适的检测器，如常用的紫外可见光检测器，只能对一些多不饱和脂肪酸有相应，因此，脂肪酸在检测之前往往需要衍生化，而衍生化的试剂和气相色谱法所用到的有所不同。 henNissen H P等[11]提到用氯仿-甲醇或正己烷-异丙醇法来提取生物基质中的脂质，采用TLC分离脂质中的游离脂肪酸和甘油三酯，建立了不同的衍生和洗脱的HPLC分析方法，在此稍做了总结