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3.4.7基因组文库的保存 11
3.5 讨论 11
3.5.1总DNA提取检测 12
3.5.2限制性内切酶的选取 12
3.6小结 12
第4章 Bacillus cereus ILR58基因文库的筛选 13
4.1方法 13
4.2结论 14
4.2.1文库的复制 14
4.2.2备用板的选用 14
4.2.3筛选结果 14
第5章 nudF表达 14
5.1重组表达载体构建 14
5.1.1材料和试剂 14
5.1.2培养基 14
5.2实验方法 15
5.2.1连接 15
5.2.2制备E.coli W3110感受态细胞 15
5.2.3转化反应 15
5.3重组子鉴定 15
5.4小结 15
结 论 16
致 谢 17
参考文献18
附录 20
第1章 绪论
1.1 异戊烯醇介绍
1.1.1异戊烯醇物理化学性质简介
异戊烯醇（Isoprenol）化学名 3-甲基-2-丁烯-1-醇 3-甲基-2-丁烯醇，可燃烧。 用途： 用于苯氯菊酯杀虫剂以及其它精细化学品的合成，是生产医药或农药的重要原料。其他性质见表1.1。
表1.1 异戊烯醇的物理化学性质简表
性质 指标量
分子量 86.13
化学结构式 CH3C(CH3)=CHCH2OH
折光率 1.442-1.444
密度 0.844g/cm3
沸点（101.3kPa） 141.5°C
闪点 43.3°C
外观特征 为无色透明带有浓酯香的液体。
溶解性 不溶于水，溶于醇、乙醚等有机溶剂
化学性质 活泼
1.1.2 异戊烯醇在工业中的生产方法及用途
根据选择的反应原料的不同，异戊烯醇的合成方法主要分为以下3大类：
（1）普林斯（Prins）法是目前合成烯醇的一种有效方法：将聚甲醛和异丁烯在磷酸氢二钠存在下反应生成异戊烯醇（3-甲基-2-丁烯-1-醇）和烯醇（3-甲基-3-丁烯-1-醇）的混合物， 再使用催化剂异构化进行双键转位得到异戊烯醇。
（2）异戊二烯法：将异戊二烯与氯化氢反应，生成1-氯-3-甲基-2-丁烯（氯代异戊烯），其中氯代异戊烯放在反应器中加入乙酸钠水溶液并搅拌，在100~110℃下反应3~4h，分层得到异戊烯醇乙酸酯，向其中加入30％氢氧化钠溶液，加热回流3h后分层，将有机层蒸馏，收集50~58℃、2.7kPa的馏分即为异戊烯醇
（3）甲基丁烯醇异构法：碱性条件下，丙酮与乙炔进行炔化反应，生成乙炔基异丙醇，然后以 Pd∕C 催化剂进行加氢得到甲基丁烯醇，再异构化制得异戊烯醇（2-甲基-3-丁烯-2-醇）[1]。
同时异戊烯醇有着极其广泛的用途，能用来合成拟除虫菊酯类杀虫剂的中间体贲亭酸酯，贲亭酸酯即3,3-二甲基-4-戊烯酸甲（乙）酯，是制备拟除虫菊酯关键中间体二氯菊酸酯、DV菊酰氯（二氯菊酰氯）的重要原材料；能用来制备柠檬醛（C10H16O），柠檬醛广泛应用于食品以及香料工业中，是一种合成文生素A、E和几种类胡萝卜素的化学中间体；王秋员对异戊烯醇合成香料硫代香叶醇进行了研究，硫代香叶醇被广泛应用于各种日用品的调香，如洗涤剂、喷雾剂、香皂、香水中[2]。
1.1.3 生物法制取异戊烯醇研究概述
天然的异戊烯醇主要由光和生物合成并散发到大气中，能产生异戊烯醇的生物包括某些绿色植物如银杏等，微生物有真菌和细菌等。由于植物体释放异戊烯醇的量很小，异戊烯醇收集过程难度高，利用植物进行大批量生产的可能性很小。与植物相比，微生物具有个体小生长速度快等优点，能够利用廉价且易得的可再生生物质资源。因此，利用基因重组等生物技术改造微生物，使其具有发酵得到异戊烯醇的功能，该生产方法具有原料环保、成本低廉、产量高、生产周期快、环境友好等优点，近年来已成为研究学者们颇为关注的生产方法[3]。因此，通过基因工程手段改造菌株的代谢途径，从而实现异戊烯醇的大规模生产有着极为乐观的前景。