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3.1 无菌苗的获得 16
3.1.1 消毒时间对无菌苗获得的影响 16
3.1.2 不同激素配比对无菌苗获得的影响 16
3.2 愈伤组织诱导 17
3.2.1 莪术叶片与莪术嫩芽对愈伤组织诱导的影响 17
3.2.2 不同激素的配比对莪术叶片愈伤组织诱导的影响 17
3.2.3 光照对诱导莪术愈伤组织的影响 19
3.3 不定芽的诱导 19
3.3.1 激素配比对诱导不定芽的影响 19
3.3.2 光照对诱导不定芽的影响 21
4 结论 22
参考文献 23
致谢 25
1 前言
莪术是姜科类植物，它的的种类有植物蓬莪术、广西莪术和温郁金,最早记载于《药性论》,其产地主要位于浙江、四川、广西等。莪术是我国常用的中药,其性温辛,具有行气破血、消积止痛之功效[1]。可用于治疗瘀血经闭、腹胀积食等。有研究记载，莪术对于抗肿瘤、抗血栓、抗炎、抗病毒、抗早孕、抗菌、保肝、抗纤文组织增生，促进机体免疫力, 改善胃动力等有较好的作用。是临床上常用的活血化瘀药。莪术的根茎及块根是药用部分，近年来的研究显示，莪术中主要的化学成分有莪术油，姜黄素，多糖成分和微量元素等。而如今较为热门的当属莪术油的研究了。在莪术油中，以β-榄香烯为主要成分的榄香烯类化合物, 对于抗肿瘤有非常好的效果。β-榄香烯能缩小或稳定的肿瘤，抑制肿瘤细胞的扩散或增值，从而起到缓解症状，延长生存期的作用。尤其对情况差、高龄、危重患者更突出其优越性，是目前临床常用的莪术提取物。在临床应用中莪术的也非常广泛的，它有着巨大的发展潜力和广阔的市场前景 [2]。
然而常规的栽种技术，以根茎进行营养繁殖的方式生产速度很慢，成活率和繁殖系数低，耗种量大，病毒虫害侵染严重，导致莪术的质量下降，难以满足市场需求。因此，为了解决莪术生产上存在的问题，莪术的组织培养和离体繁殖已成为国际上莪术规模生产所采用的重要繁殖手段。例如，使用时原材料少，只要茎尖，茎小片断或其他器官可以在试管中多次增值系统，可无需常规培养的人力与土地，大大降低了成本。组织培养还可以大量繁殖常规难以繁殖的植物。譬如自然繁殖系数低的植物、濒临绝种的植物，拯救物种与食物链，从而保护地球。组织培养也不受气候和季节的限制，而且繁殖速度快、繁殖周期短。因此试管苗全年都可以在最佳的环境条件下生长，在一般情况下，因一月左右就能完成一个周期，因此大大地减少了种植时间，从而提高经济效益。最重要的是，因为组织培养是在严格无菌的条件下完成整个过程，因此在繁殖中不会受到病毒虫害的侵染。
本课题研究的主要目的是运用莪术的组织培养技术，使莪术的繁殖周期加快，降低种植时间，提高莪术的成活率，并在此基础上，生产出无病毒化，品质优良的莪术，满足市场需求，也能为接下来莪术的细胞研究奠定良好的基础。
1.1 莪术的研究现状
1.1.1 化学成分的研究
莪术Curcuma zedoaria(Christm)Rose．是一种多年生姜科姜黄属草本植物[3]。在中医方面，莪术作为中药在我国的医学是谁已有上千年的历史，并且应用十分广泛。在《本草经疏》、《开宝本草》和李时珍《本草纲目》中均有记载[4]，莪术具有行气破血、消食化积之功效，被称为血中之气药。研究表明，莪术对于抗肿瘤，抗血栓形成，抗炎，抗病毒，抗菌，抗早孕，保护肝脏，提高机体免疫力，改善胃动力，具有良好的效果。根茎和块根是莪术主要的药用部位，其中含有的挥发油类和姜黄素类成分[5]、微量元素、多糖则是主要的化学成分。从古到今的研究中，对于挥发油类和姜黄素类已十分广泛与深入。挥发油是莪术主要的活性成分，在莪术中含量为1.96%-2.5%。根据中国药典(2005)版挥发油测定法测定，温莪术含挥发油1.0%-1.5%[6]，此种莪术才可以成为是具有优良品种的莪术。在对于挥发油的化学成分进行深入研究发现，其中含有各种各样的倍半萜类物质，是组成莪术油的主要成分，如莪术酮、榄香烯、莪术二酮、莪术醇、莪术烯、姜黄素、莪术烯酮、异莪术烯醇等。其中能起到抗癌作用的主要为榄香烯、莪术醇、莪术酮、莪术二酮。莪术挥发油能促进癌细胞凋亡，免疫激活和免疫反应和升高白细胞作用的调节，是肿瘤治疗的有效物质。获术油中提取的主要成分为β-榄香烯为主的榄香烯类化合物, 具有稳定或缩小肿瘤瘤体, 抑制肿瘤细胞的扩散与增殖, 从而起到缓解症状，延长生存期的作用，为临床常用的中药提取物。与化疗药物相比，莪术油无诱变作用，是安全有效的抗肿瘤药物。挥发油的提取方法分为水蒸气蒸馏法和二氧化碳超临界流体提取法[7]。由于挥发油的超临界CO2萃取挥发性成分中除了含有水蒸汽蒸馏法，还含有大量的脂溶性化合物。水蒸气蒸馏的方法很简单，但较高的加热温度，能分解的挥发油一些成分，从而降低提取率。还会使油和水形成乳状液，难以分层，对接下来精制莪术挥发油带来了不便。但是超临界萃取法却没有前者的不便。后者其萃取能力强，而且效率高，在同一时间，提取时间短，能耗低，而且避免了有机溶剂的使用，以免污染环境。二苯基庚烷类是姜黄素类主要成分，以莪术为原料，能选用高速逆流色谱法得到。广西莪术除含有上述成分外，还含有锌、铁、镍、锰等l3种微量元素[1]。在这13种微量元素中，锰作为人体的必需元素，具有特殊的生理活性，使在体内的超氧化物转变成无氧化物，具有防癌，抗癌作用。
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