超声温度的高低对黄酮提取量的影响：

取浓度为60%的乙醇，料液比为1:20，超声时间为30min，超声温度分别为35℃、45℃、55℃、65℃、75℃来进行实验，经过旋转蒸发后称量可得到结果如下：

图2-3 不同超声温度对橙皮黄酮提取量的影响

Fig。2-3 Effects of extraction temperature on flavonoid yield

1,2,3,4,5分别代表超声温度的五个水平。由上图可知，超声温度的高低对橙皮黄酮的提取量有影响，随着超声温度的提高黄酮的提取量会逐步增大，当超声温度达到65℃时黄酮的提取量也达到最大，持续增高超声温度则黄酮提取量会低降，因此超声温度取65℃最为适合。

超声时间的长短对黄酮提取量的影响：论文网

设定乙醇体积分数为60%，料液比为1:20，超声温度为65℃，超声时间为10min、20min、30min、40min、50min进行试验，旋转蒸发并称量得到结果如下：

图2-4 不同超声时间对橙皮黄酮提取量的影响

Fig。2-4 Effects of extraction time on flavonoid yield

1,2,3,4,5依次代表五个水平的超声时间。由上图可知，超声时间的长短对橙皮黄酮的提取量有影响，随着超声时间的延长，橙皮黄酮的提取量会增加，当超声时间达到30min时，提取量达到最大，继续延长时间则提取量会下降，因此实际超声时间取30min最为适合。

2。2。2 福林-酚比色法测定黄酮提取量

没食子酸标准曲线

（1）配制没食子酸标准溶液：准确称取0。01g没食子酸粉末，用蒸馏水溶解并且定容至100ml，这样即得到浓度为100μg/ml没食子酸的标准溶液。

（2）准确移取0ml、0。25ml、0。50ml、0。75ml、1。00ml、1。25ml、1。50ml没食子酸标准溶液于25ml的试管中，然后分别滴加3。0ml的福林-酚试剂，摇匀后静置30s，再加入6。0ml12%Na2CO3溶液，摇匀定容至25ml，在25℃下黑暗放置2h，以0样为空白对照，在760nm波长处测定其吸光度，每组平行3次，取平均值计算。以没食子酸标准溶液为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线如下：

图2-5 没食子酸标准曲线

Fig。2-5 Gallic acid standard curve

紫外分光光度计测定黄酮含量

首先用无水乙醇配置浓度为800ppm的样品提取物，取出1。0ml此浓度的样品提取物，加入试管中，再加入3。0ml的福林-酚试剂，摇匀静置30s后加入6。0ml12%Na2CO3溶液，摇匀定容至25ml，在25℃下避光放置2h，在760nm波长处测定吸光度。以标准溶液浓度（μg/ml）为横坐标，吸光度值为纵坐标，每组平行三次，取平均值计算。

2。2。3 DPPH自由基清除法测定黄酮的活性

 DPPH自由基清除法简介

DPPH是一种比较稳定的自由基，只能接受一个电子或氢离子，在517nm波长处有最大吸光度。它的醇溶液为紫色，高温情况下自由基较活泼，因此需要在避光低温的条件下保存。当溶液中有自由基清除物如黄酮等物质存在时，DPPH自由基会被这些物质捕捉，直接导致其在517nm波长处的吸光值下降，因此，吸光度的下降程度能够反映溶液中自由基清除物的活性大小，吸光度下降越大，自由基清除物的活性就越大，根据此原理，我们就可以采用DPPH自由基清除法来测定所提取黄酮的活性。文献综述

Trolox标准曲线

0。1mmol/L DPPH溶液的配制：称取39。4mgDPPH粉末将其溶解于1000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，避光保存。

（1）用无水乙醇配制成1000μmol/L Trolox标准品，取配制好的DPPH溶液2mL，向其中逐滴加入Trolox标准品，边加边摇匀，并观察溶液颜色的变化情况，当溶液颜色基本褪去时，记下Trolox标准品的加样量，为200μL。以此用量为中值设置十个呈等差数列的用量，即为40、80、120、160、200、240、280、320、360、400μL。