1。试验材料
1。1实验动物
1。1。1 健康成年雄性Sprague-Dawleg(SD)大鼠,体重约200~250 g,杭州师范大学动物实验中心提供,所有动物实验遵照国家实验动物饲养和使用指南,大鼠称重分笼饲养,自由进食和饮水,12小时明暗循环,室温22~25 ℃;C57BL/6小鼠,雄性,体重为18~22g,购于杭州师范大学动物实验中心,动物合格证号:SCXK(浙)2008-0033。所有动物实验遵照国家实验动物饲养和使用指南,小鼠分笼饲养,自由饮食和饮水,12小时明暗循环,室温22~25℃。
1。1。2 C57BL/6小鼠分笼饲养,所有动物实验遵照国家实验动物饲养和使用指南,自由饮食和饮水,12小时明暗循环,室温22~25℃。
1。2药物和试剂
1。2。1 药品:脂多糖(LPS,美国 Sigma); MPTP溶液(30mg/kg)
1。2。2 脑组织取备试剂:10%甲醛;生理盐水;
1。2。3 免疫组化试剂:羊源Anti-iba-1抗体(购自英国Abcam公司),标准胎牛血清白蛋白(北京鼎国生物技术有限责任公司),PV-9003抗羊超敏二步法检测试剂盒,DAB显色试剂盒,枸橼酸钠,免疫组化液体石蜡笔(均购自北京中杉金桥生物技术有限公司);
1。2。4其他试剂:多聚赖氨酸溶液0。1%(购自上海生工生物工程有限公司),水合氯醛、二甲苯、无水乙醇等均为国产或进口分析纯产品。
1。3实验仪器和材料论文网
显微镜(YS100,日本Nikon公司);石蜡切片机(RM2235,德国Leica公司);漂片烤片仪(HI1210,德国Leica公司); Mettler Toledo酸度计(上海捷辰仪器有限公司);电子天平(AL104,上海Metter Toledo仪器有限公司);超纯水仪(Direct-Q3,美国Millipore公司);电热烘箱(DNP-9022,上海精宏实验设备有限公司);台式恒温振荡器(THZ-D,苏州市培英实验设备有限公司);58℃~60℃切片石蜡(上海华灵康复机械厂);密封式恒温可调电加热器(浙江省嘉兴市凤桥电热器厂);高压锅(苏泊尔);显微镜载玻片(上海好迪实业有限公司);微量离心管(eppendorf,EP);制冰机(AF100,SCOTSMAN)
1。4溶液配制
1。4。1生理盐水(NS)
称取氯化钠 9 g
加去离子水定容至1000 ml,4 ℃保存
1。4。2 LPS溶液(2。5 mg/kg)
取LPS 0。05 g
加NS定容至 40 ml,4 ℃保存
1。4。3 10%水合氯醛
称取水合氯醛 40 g
加去离子水定容至 400 ml,4 ℃避光保存
1。4。4 0。01 M PBS溶液
取NaCl 8 g
KCl 0。2 g
KH2PO4 0。27 g
Na2HPO4 1。42 g
加去离子水定容至1000 ml,浓HCl调pH7。4,4 ℃保存
1。4。5 枸橼酸缓冲液(0。01 M)文献综述
取枸橼酸缓冲液 1包
加去离子水定容至 2000 ml,4℃保存
1。4。6 TBST缓冲液(10×)
取Tris-HCl(PH7。6) 30。28 g
NaCl 80。15 g
Tween-20 10 ml
加双蒸水定容至1000 ml,临用时再用去离子水稀释10倍,4℃保存
1。4。7 5%BSA封闭液
取BSA 0。25 g
加稀释后的TBST缓冲液(10×)定容至5 ml,4 ℃可保存数天