摘    要CRISPR-Cas9 是一种新兴的基因编辑系统,它为基因组编辑提供了一种简便、高效、多样化的方式。但CRISPR/Cas9介导的DNA定点整合效率仍有待提高。【目的】综合利用环形DNA的高转染效率和线性DNA的高重组率,提高CRSIPR/Cas9系统在基因整合中的效率。【方法】充分利用环形DNA和线性DNA的优点,通过改造CRSIPR/Cas9系统的供体质粒(Donor)序列,使Donor质粒在与CRSIPR/Cas9一起转入细胞时可以形成更有利于同源重组的形态,从而提高Donor质粒在同源重组中的效率,通过观察改造后Donor质粒转染后的荧光表达结果确定定点整合效率是否提高。【结果】在CRISPR/Cas9的识别和酶切下,改造后Donor质粒可被Cas9酶切而线性化,转染后荧光表达结果初步表明改造后Donor质粒可增强定点整合效率。【结论】改造后Donor质粒有利于提高基因整合中的效率。89870

Abstract   CRISPR-Cas9 is an emerging gene editing system that provides a simple, efficient and perse way for genome editing。 But low integration efficiency of CRISPR/Cas9 mediated gene transfer is still need to be improved。 Objective:To improve the efficiency of CRSIPR / Cas9 system in gene integration by using the high transfection efficiency of circular DNA and the high recombination rate of linear DNA。 Methods:By utilizing the advantages of circular DNA and linear DNA, the Donor plasmid can be formed in a more favorable form for homologous recombination when transformed into the cells with CRSIPR / Cas9 by transforming the Donor sequence of the CRSIPR / Cas9 system。 To improve the efficiency of Donor plasmid in homologous recombination and observe the fluorescence expression of Donor plasmid。Results:Under the recognition and digestion of CRISPR / Cas9, the Donor plasmid could be cleaved and cleaved, and the results of fluorescence expression were the same as those of the experiment。Conclusion:CRISPR / Cas9 system is beneficial to improve the efficiency of Donor plasmid in gene integration。

毕业论文关键词:基因编辑; CRSIPR / Cas9系统; 质粒构建; 质粒转染; 荧光表达

  Keyword: Gene editing;  CRISPR / Cas9 system; Plasmid construction; Plasmid transfection; Fluorescence expression

目    录

1。 引言 5

2。 实验材料和方法 5

2。1 实验试剂与设备 5

2。2 实验方法 7

2。2。1质粒抽提 7

2。2。2构建GFP-Donor/m质粒 8

2。2。3连接反应 8

2。2。4 DC-DON-sgRNA体外酶切源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766 实验 8

2。2。5质粒转染 10

2。2。6细胞共转染实验 10

2。2。7筛选 11

3。实验结果 11

3。1 Donor-R26质粒酶切电泳和测序验证 11

3。2 Donor-R26体外酶切实验 12

3。3转染最佳实验剂量确定 12

3。4细胞共转染实验荧光结果 13

3。5筛选后荧光结果 15

4。讨论 16

5。结论与展望 17

参考文献 17

致谢

上一篇:大学生中医体质类型与自卑心理的相关性研究
下一篇:没有了

县域农村公共卫生服务复...

综合护理干预對系统性红...

预见性护理干预對心血管...

长期卧床患者功能恢复的...

针對性护理對功能性消化...

掌上电脑茬医院信息系统...

原发性中枢神经系统淋巴...

护理干预對肺癌放化疗患...

Bi位掺杂BiFeO3陶瓷的制备与表征

新生代农民工的婚恋问题研究+文献综述

美日印发展信息产业的模...

我国公务员考试与录用制度问题研究

立体成型技术在推进剂成型方面的探索研究

卫健委官员未来生育政策...

旧衣服回收洧哪些交易平...

房地产财务成本管理问题...

数字全息术研究铁在酸性...