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体外消化地龙蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
中药地龙为钜蚓科动物参环毛蚓，威廉环毛蚓、通俗环毛蚓和栉盲环毛蚓等的干燥全体。前一种药材习称“广地龙”，后三种习称“沪地龙”。此外，在我国广泛分布的还有赤子爱胜蚓以及其选育种太平二号、北星二号、北京条纹蚓等[1]。
地龙作为平肝熄风药的代表，具有清热、平肝、定惊、止喘、通络、利尿之功效，可治疗20多种疾病[2]。随着现代中药分离提取技术的不断发展，目前有很多地龙活性成分被分离出来，包括纤溶酶，胆碱酯酶，过氧化物酶，抗微生物蛋白，溶血蛋白以及抗菌肽等。这些活性物质决定了地龙的多种药理作用。其中，蚓激酶的抗血凝溶血栓作用机制研究的最为深入，已有蚓激酶口服制剂研制成功，投入市场，“注射用蚓激酶”也已进入招商阶段，即将上市[3]。地龙蛋白不仅具有溶血栓、抗凝血功能，部分地龙蛋白对动物机体的免疫系统还具有调节功能。
动物饲养过程中，蛋白质的摄入过程主要包括饲喂，消化吸收等过程。蛋白质通过咀嚼混合，进入胃腔由非特异性胃蛋白酶消化，一段时间后进入小肠，被胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶为主的消化酶混合物系统进一步特异性降解，游离氨基酸和小肽由肠上皮细胞吸收进入血液为机体所用。未消化的蛋白质、肽和血红素铁等进入大肠，被肠道菌群进一步利用。通过体外模拟实验，即通过模拟消化道的pH值、温度、酶浓度、反应时间和其他环境，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶或其他蛋白酶对食物蛋白质进行消化法降解。在体外模拟中，可以准确地收集各种阶段的消化产物进行定性和定量，且易于控制实验条件[6]。
脾脏作为动物机体的的重要免疫器官，由红髓和白髓构成，具有造血和血液过滤功能，也是淋巴细胞迁移和接受抗原刺激后发生免疫应答、产生免疫效应分子的重要场所[7]。脾淋巴细胞是参与机体免疫反应的一大类免疫活性细胞，在PHA、ConA等有丝分裂原的刺激下，可在体外发生分裂繁殖。在此基础上加入某种药物之后，可以激活一种或多种免疫细胞，从而达到增强机体的非特异性免疫或特异性免疫的功能，或者使低下的免疫功能恢复正常。这种药物就是免疫增强剂，反之，被称为免疫抑制剂[8]。
胸腺嘧啶核苷酸（TDR）作为细胞增殖过程中合成DNA的原料，细胞对其的吸收量可以表示细胞DNA合成的多少，间接反映细胞增殖的快慢。利用放射性同位素3H对TDR进行标记，通过检测细胞吸收的3H的量，来检测淋巴细胞增殖程度的研究方法称为3H-TDR掺入法[9]。
本课题以小鼠脾淋巴细胞为实验对象，选择地龙蛋白为代表，于体外消化后配置含不同浓度消化产物的RPMI-1640培养基，在加入有丝分裂原的前提下，研究体外消化地龙蛋白与小鼠脾淋巴细胞增殖率之间的关系。