干扰CERS2表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响 (2)

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前言

乳腺癌是现代女性最易患的恶性肿瘤，它的发病率是女性恶性肿瘤中的首位。在我国，乳腺癌从20世纪90年代初就已经成为女性恶性肿瘤第一位。乳腺癌位于体表，虽然肿瘤容易通过患者自己察觉，以及其他检查手段，例如B超检查、磁共振成像扫描、红外线扫描等被检出，但乳腺癌仍然是第二位女性肿瘤相关死因。绝大多数乳腺癌的致死原因是由于肿瘤细胞的扩散和肿瘤的继发生长[1-4]。

神经酰胺合成酶2（CERS2），亦称LASS2（人源性长寿保障基因2）或TMSG-1（肿瘤转移抑制基因）是近年来发现的一个新的肿瘤转移抑制基因的候选基因，研究表明它肿瘤的迁移和侵袭有密切关系[4]。

LASS2/TMSG-1具有同源域和TLC域两个重要的保守功能域，属于LASS家族。有研究表明，它具有重要的生物学功能，它可以促进神经酰胺的合成，而且它与癌细胞的迁移和侵袭密切相关，其中包含对细胞生长有抑制作用以及对细胞凋亡会起到促进作用，抑制癌细胞迁移和侵袭等[4]。此外，LASS2与质子泵V-ATPase结合会抑制质子运输能力，因此对细胞内外的氢离子浓度有调节作用，从而可以起到抑制基质金属蛋白酶的分泌和激活的作用[5]。

基因治疗作为一种新的治疗方法在医疗领域备受关注。在基因治疗中，肿瘤基因治疗是它的主要应用领域。DNA重组技术的成熟为基因治疗提供了基础，它被认为是在医疗和制药领域的一次革命，它是现代生物医学研究中的一个重要的里程碑[5-9]。

本课题目的是，探究干扰CERS2的表达对癌细胞转移的影响，为乳腺癌治疗提供新靶点。

1材料与方法

1.1细胞株与细胞系

MDA-MB-468，SK-BR-3，T-47D和MCF7细胞购买于上海细胞库。

1.2实时定量PCR（Real-time PCR）

1.2.1细胞总RNA的提取

选择生长状态良好的细胞利用Trizol试剂抽提出总的RNA，每皿细胞中加入1 ml Trizol，用刮刀划几道后放入离心管中，充分混匀。在样品中加入氯仿，震荡10-15秒后，在室温下孵育5到10分钟；离心10-15分钟；将上清液放入新的离心管中，加入异丙醇，在室温下孵育约10分钟，4oC下离心10分钟；倒掉上清，每毫升Trizol试剂至少用1毫升75%乙醇洗涤，4 oC下离心5分钟；待RNA沉淀后溶解沉淀。