摘 要：依鲁替尼是一种可以治疗套细胞淋巴瘤(MCL)的小分子BTK抑制剂。是一种重要的抗肿瘤药物，具有非常广泛的用途。其关键中间体(S)-1-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶的合成吸引了广泛的关注。本课题组在前期的工作中构建了一株工程菌，能够在温和条件下高选择性的对1-叔丁氧基-3-哌啶酮进行不对称还原反应，生成(S)-1-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶。本课题主要针对其产酶量低等问题进行研究系统地对其碳源、氮源、初始pH值、加入诱导剂IPTG的时间以及诱导剂的浓度对发酵产酶情况的影响，确定每一种影响因素的最适条件，培养得到高活性醇脱氢酶生物催化剂。最后所确定下来的最适培养条件为：可溶性淀粉30 g/L、酵母粉15 g/L、氯化钠5 g/L、pH为6.0、加入诱导剂IPTG培养的时间是3 h、加入IPTG的量是150 μl。71003

毕业论文关键词：醇脱氢酶；不对称还原；发酵优化

Optimization of the culture conditions for recombinant E. oli containing alcohol dehydrogenase and glucose dehydrogenase

Abstract: Irinotinib is a small molecule BTK inhibitor that treats mantle cell lymphoma (MCL).It is a kind of important antitumor drug which has wide uses and can use microbial ketone reductase to catalytic synthetize the key intermediates— (S)-N-boc-3-hydroxy-piperidine under mild conditions. This article is to study this ketone dehydrogenase produced from recombinant E. Coli, through studying the effect of carbon sources, nitrogen source, pH value and the time of addition of the inducer IPTG during fermentation systematically and concentration of the inducer, and determining the optimum conditions, to obtain a highly active alcohol dehydrogenase biocatalyst. The optimal conditions for the fermentation are the following: soluble starch 30g / L, yeast extract 15g/L, NaCI 5g/L, pH 6.0, adding inducer IPTG time is 3h, IPTG concentration is 150μl.

Key words：Alcohol dehydrogenase；Asymmetric reduction；Optimization of fermentation

目录

1研究背景 1

1.1 手性分子与生物催化 1

1.2 醇脱氢酶介绍 1

1.3 醇脱氢酶前景 2

1.4 醇脱氢酶在手性药物中的应用 2

1.5 醇脱氢酶反应机理 3

1.6 影响重组菌产酶条件的因素 4

1.6.1 碳源 4

1.6.2 氮源 4

1.6.3 温度 4

1.6.4 初始发酵液pH 5

1.6.5 诱导剂IPTG 5

1.7  本课题的研究 5

1.7.1  研究意义 5

1.7.2 研究目的 5

2实验操作流程 6

2.1 大肠杆菌发酵优化的操作流程 6

3实验材料与方法 7

3.1 实验材料 7

3.1.1 菌种 7

3.1.2 培养基 7

3.1.3 主要试剂 7

3.1.4 主要仪器 8

3.2 实验方法 8

3.2.1 优化前的培养条件 8

3.2.2 培养条件优化 9