表清单

表序号 表名称 页码

表3-1 发酵液的加热法处理数据 7

表3-2 发酵液的pH值法处理数据 7

表3-3 发酵液的无水乙醇直接沉淀法处理结果 8

表3-4 发酵液的(NH4)2SO4分级盐析法处理结果 8

表3-5 溶媒萃取试验数据 9

表3-6 发酵液活性物质粗提液层析结果 9

表3-7 纸电泳试验数据 10

表3-8 光稳定性试验数据 10

表3-9 热稳定性试验数据 10

表3-10                  酸碱稳定性试验数据 11

1 绪论

植物内生真菌是一个庞大的真菌类群，其活性物质非常丰富，其中抗肿瘤活性物质一直是研究之重，是人们寻找新型抗肿瘤药物的重要资源。本试验从植物花生中分离出拟茎点霉，前期的实验结果表明该内生真菌对肺癌细胞A549具有很好的抑制作用，对其进行纯化，并进行发酵培养后，检测其代谢产物的抗肿瘤活性。培养拟茎点霉发酵液是为了大量生产实验所需的菌种，为后续试验做准备。论文网

发酵液属于复杂的多相体系，发酵液中抗肿瘤活性物质浓度低，杂质组成复杂，除了含有菌丝体、蛋白的胶状物和残留的培养基外，还存在很多其他物质。若不经预处理，很难有效提取到拟茎点霉发酵液中的抗肿瘤活性物质成分。因此，为了得到拟茎点霉发酵液中的抗肿瘤活性物质，需要对发酵液进行预处理工作来加速固相、液相分离，将杂质去除。通过提高发酵液的流动性，改善发酵液的粘稠度和过滤性能，发酵液中的抗肿瘤活性物质组分的纯度增大，杂质比例减少，有利于下一步对抗肿瘤活性物质的提纯和操作。过滤和离心是其最基本的单元操作。通过比较加热法、调节pH值法、无水乙醇直接沉淀法和(NH4)2SO4分级盐析法这几种发酵液预处理的方法，来确定拟茎点霉抗肿瘤活性物质的最佳提取方法。

未经预处理的拟茎点霉发酵液含有很多杂质，且抗肿瘤活性物质占发酵液的比例很少，通过加热法预处理后，除去了较多无活性的沉淀，达到使抗肿瘤活性物质保留在发酵液上清液中的目的。但是发酵液中还有很多小分子物质与抗肿瘤活性物质共存。为了进一步分离提纯发酵液中的抗肿瘤活性物质，需要对发酵液的理化性质进行研究，探索出合适的分离纯化方法。本试验设计溶媒萃取试验、层析试验、纸电泳试验和稳定性试验这几个试验，基本能够概括拟茎点霉抗肿瘤活性物质的理化性质，可根据其理化性质的研究，进一步分离提纯发酵液抗肿瘤活性物质。

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 试验菌种

拟茎点霉菌种

2.1.2 试剂

2.1.2.1 发酵液粗处理试剂

     无水乙醇 分析纯

     PBS磷酸盐缓冲液

     H Cl溶液 分析纯