图3-4 不同浓度木犀草苷处理癌细胞后的ROS水平 10

图3-5 NAC联合木犀草苷处理细胞后的ROS水平 10

图3-6 双氧水联合木犀草苷处理细胞后的ROS水平 11

图3-7 酰胺联合木犀草苷处理细胞后的ROS水平 11

图3-8 BSO联合木犀草苷处理细胞后的ROS水平 12

图3-9 荧光显微镜下显示的细胞内ROS水平 12

图3-10 木犀草苷对细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平的影响 13

1 引言

目前，全世界每年患肝癌者人数约为74.8万，发病率位列所有癌症中第六位，仅次于肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌和前列腺癌，其中男性约为52.2万人，女性约为22.6万人。全世界每年肝癌死亡人数约为69.6万，相当于一个发达小县城的人数 [1]。死亡人数也仅次于肺癌、胃癌，居第三位。中国男性肝癌每年发病293,318人，女性肝癌发病101,452人，一共有394770人，占到全世界新增患者的52.7%，发病人数位居世界第一。而且中国的肝癌患者人数仍然在增长，预计在2020年，中国肝癌患者人数大约增长到44万，这比一些小县城的人口还要多。在肝癌的早期确诊阶段，我们可以通过外科手术切除或者肝移植治疗，但是在肝癌晚期，我们没有有效的治疗方法。恶性肿瘤的两个主要生物学特征是转移与侵袭，这两个特征也是导致肿瘤治疗失败的主要原因。统计数据表明，在所有的肿瘤病人中，约60%就诊的肿瘤病人已经发生了癌细胞转移，80%的患者周围血中能检测到癌细胞，76%的患者在肿瘤复发、转移的两年内死亡。因此，患者急需安全有效的药物来改善身体状况、治疗肿瘤。现在的许多化学抗癌药物都具有毒性和副作用，而且效果并不理想。虽然当下的肿瘤手术、化疗放疗以及肿瘤诊断水平不断提高，但是目前控制肿瘤转移的药物并没有达到理想的效果。在现代抗肿瘤药物中，天然药物在治疗肿瘤疾病、抑制肿瘤转移及改善患者的生存质量上具有独特的优势。在多种植物中，如菊花、银杏等，都发现了一种黄酮类化合物木犀草苷，该化合物显示了广泛的药理特性，如抗氧化活性和抗炎 [2]。近年来，黄酮类化合物的抗肿瘤特性备受大众的高度关注，越来越多的实验研究表明，木犀草苷具有抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭的作用。还有报道表明，木犀草苷能抑制结肠癌细胞的增殖，但是尚未明确其相关机制 [3]。本实验主要研究木犀草苷对肝癌细胞转移的抑制作用。文献综述

本实验以人肝癌Huh-7细胞株为研究对象，探究木犀草苷作用于Huh-7细胞后细胞的转移能力的变化，最后探讨其相关机制。

2 材料与方法

2.1 药品和试剂

木犀草苷（纯度：99.7%；批号，025-120622）购自成都中草药有限公司；二甲基亚砜（DMSO）；胎牛血清（FBS）；Trypsine-EDTA；链青霉素混合液（100×）；实验前，木犀草苷溶于二甲基亚砜中，且在-20 oC温度下保存，母液浓度为20 mmol·L-1 , 二甲基亚砜终浓度小于0.1%，细胞在低于0.1%的二甲基亚砜下，其生长状况不会受到影响。

2.2 实验材料

人肝癌细胞株Huh-7，购自日本生物研究集存库（Japanese Collection