1。3 实验方法

1。3。1 小鼠处理方法

饲养一段时间后，小鼠被随机均匀分配到6个实验组中，每个小组10只小鼠。所有小鼠的实验周期为21d 。I组用0。86%的生理盐水进行腹腔注射并灌胃，剂量均为0。2mL。II组采用100 µg·kg-1的EGCG生理盐水，对小鼠进行灌胃并在后期进行腹腔注射，每只小鼠剂量同上，均为0。2 mL。III组是纯NOD处理组，剂量为10µg·kg-1（其中小鼠半致死浓度为30 µg/kg）。IV、V及VI组在NOD (10µg·kg-1) 处理前，用不同浓度梯度(50、100和200 mg·kg-1)的EGCG进行预处理。详见表1。暴露完毕后，将小鼠麻醉固定，采用断颈法处死。取出小鼠肝脏，把它经生理盐水漂洗后置于滤纸上吸干并称重观察，之后分组标号，放入预冷eppendorf管中，加入液氮，封存在-80°C冰箱内。本实验检测对象为小鼠肝脏。对所有小鼠肝脏样品在冰浴条件下进行手动玻璃匀浆器匀浆，所有样品匀浆的程序相同（每个样品30次匀浆，持续时间为6min左右）。匀浆完成后，参照各个氧化应激指标测定严格按照试剂盒说明书进行测定。测定的氧化应激指标包括GSH、GST、GR、GPx、ROS及MDA。

表 1 不同组别的小鼠处理方法

Table 1 Different treatments of mice in different groups

组别 小鼠处理方法

0d-7d 7d-21d

I 对照组 0。86%生理盐水 i。g。 0。86%生理盐水 i。g。

0。86%生理盐水 i。p。

II EGCG对照组 100 mg/kg EGCG i。g。 100 mg/kg EGCG i。g。

0。86%生理盐水 i。p。

III NOD处理组 0。86%生理盐水 i。g。 0。86%生理盐水 i。g。

10 µg/kg NOD i。p。

IV 低剂量EGCG保护组 50 mg/kg EGCG i。g。 50 mg/kg EGCG i。g。

10 µg/kg NOD i。p。

V 中剂量EGCG保护组 100 mg/kg EGCG i。g。 100 mg/kg EGCG i。g。

10 µg/kg NOD i。p。

VI 高剂量EGCG保护组 200 mg/kg EGCG i。g。 200 mg/kg EGCG i。g。

10 µg/kg NOD i。p。

注：i。g。表示灌胃处理，i。p。表示腹腔注射。

1。3。2 小鼠肝脏组织匀浆

称取新鲜肝脏组织（0。2-1g），将其置于冰冷生理盐水中漂洗（生理盐水置于冰箱中冷藏），用滤纸吸取组织表面多余水分。预冷移液管，量取预冷的匀浆介质，将0。86%的预冷生理盐水，匀浆介质移置烧杯中，烧杯置于冰浴状态。用灭菌眼科小剪尽快剪碎组织块。接下来将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管内，再将剩余1/3匀浆介质或冷生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆。左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中。匀浆器的捣杆垂直嵌入相匹配的匀浆管中，研磨数次（6-8min）以确保肝脏组织充分研碎。最后按照各个测定试剂盒说明的肝脏匀浆浓度进行配置。文献综述

1。3。3微量还原型谷光甘肽（GSH）测定

还原型谷胱甘肽（GSH）的测定依据Fernandez-Checa等人的方法，利用还原型谷胱甘肽（GSH）可与二硫代二销基苯甲酸（DTNB）反应，生成一种黄色化合物，可在405nm下进行比色定量测定还原型谷胱甘肽（GSH）含量。