1。3。4 谷胱甘肽-S转移酶（GST）的测定

谷胱甘肽-S转移酶（GST）是在肝脏细胞中数量最多的一类酶，它的解毒机理与肝脏解毒有关。其机理主要为：GST催化还原性谷胱甘肽（GSH）与外源性亲电子化学基团结合，放置外源性物质生物大分子共价结合，对机体造成损害。GST催化GSH与底物结合，在一定反应时间内，其活性高低与反应前后底物浓度变化呈线性关系。试剂添加完毕，混匀，1cm光径，蒸馏水调0。412nm，测定OD值。

1。3。5  谷光甘肽过氧化物酶（GPx）检测

谷光甘肽过氧化物酶（GPx）解毒机理主要为：催化还原性谷胱甘肽（GSH）与体内含量较多的一类过氧化物——过氧化氢结合，由此保护细胞膜结构，维持机体自由基平衡。按照试剂盒说明书添加试剂。前处理混匀离心10min，转速调至4000r/min，离心完成后用移液枪每个样品移取1ml上清液，放入标号的eppendorf管。显色反应添加应用液、标准液、上清液、试剂三、试剂四、试剂五。添加完成后整批试样室温静置15min，波长调至412nm处，1cm光径，测定。

1。3。6 谷胱甘肽还原酶（GR）检测

谷胱甘肽还原酶是一种黄素酶，主要起到催化氧化性谷胱甘肽GSSG还原为谷胱甘肽GSH。进而维持细胞完整性，防止血红蛋白氧化。工作液现配。紫外分光光度计于340nm处。1cm光径石英比色皿，用双蒸水调零。相应编号试管加入20μl组织匀浆，吸取2。4ml冲入试管，快速混匀，计时。倒入石英比色皿，紫外分光光度计，340 nm处比色，30s处读取吸光度值A1（反应液不超过比色皿2/3）；将此比色液倒入原试管置37℃水温恒温水浴2min。迅速倒入石英比色皿，2 min30 s读取吸光度A2。求两者差值并做好记录。

1。3。7微量丙二醛（MDA）检测

过氧化脂质降解产物中丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物。在532 nm处有最大吸收峰。按试剂盒说明书操作步骤添加试剂。漩涡混匀器混匀。试管口用保鲜膜扎紧。用针头刺一小孔，95℃水浴。40 min，取出后流水冷却，然后3500-4000 r/min，离心10 min，取上清，532 nm处，1cm光径，蒸馏水调零。测定各管OD值。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

1。3。8活性氧（ROS）测定

对照组和处理组肝脏组织匀浆，充分研碎。用流式细胞仪模块检测相应焚光强度变化，以此显示细胞内的变化规律。检测激发波长488 nm，发射波长525 nm。

1。3。9考马斯亮蓝 蛋白测定

 蛋白分子具有-NH3+基团。显色机理：棕红色考马斯亮蓝显色剂接触到蛋白标准液或样品时，染料上离子与蛋白-NH3+结合，形成蓝色溶液。通过测定吸光度计算蛋白含量。准确称取组织重量，按重量体积比加生理盐水，离心。取上清液再次稀释1%的匀浆。依次加入试剂，混匀，595 nm处，1cm光径，测定并记录。