试剂：95%乙醇、去离子水、硫酸亚铁、水杨酸、双氧水、邻苯三酚、Tris、盐酸、芦丁标准品。

1。2 仪器和设备 

UV2800紫外可见分光光度计  上海舜宇恒平科学仪器有限公司；KQ-250DE型医用数控超声波清洗器   昆山市超声仪器有限公司；DK-SI4电热恒温水浴锅 上海精宏实验设备有限公司；干燥箱、MP2002电子天平   上海恒平科学仪器有限公司；电子天平  赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；TDL-40B台式离心机  上海安亭科学仪器厂；粉碎机；循环水式多用真空泵SHB-IIIA   上海豫康教仪器设备有限公司；旋转蒸发器   上海申生科技有限公司；日立高效液相色谱seriesd – 7000；二极管阵列检测器；四极质谱仪  美国安捷伦科技；色谱柱Capcell pak C18UG120   250×4。6 mm i。d,S-5 5µm，资生堂有限公司；保护柱10×4。0 mm i。d。

1。3 方法

1。3。1测定最大吸收波长

     分别取芦丁标准品0。1 mg溶于2。9 mg的30 %乙醇中及紫藤叶叶中总黄酮提取液在200-400 nm进行紫外扫描[12]。

1。3。2制作芦丁标准曲线

    称取5mg芦丁标准品，溶解于30 %的乙醇中且定容至50mL，即得0。100 mg/mL芦丁标准溶液，然后分别吸取芦丁的标准溶液0。0、1。0、2。0、3。0、4。0、5。0 mL到5个10 mL的容量瓶中，用30%的乙醇溶液定容后放置15 min[13]。取4 mL不同浓度的芦丁溶液，以30%的乙醇溶液为空白对照，在最大吸收波长346 nm处分别测定吸光度，绘制芦丁的标准曲线。

1。3。3测定紫藤叶中总黄酮的提取量文献综述

    称取处理好的紫藤叶1。0 g，在不同的条件下进行超声辅助萃取，提取液经离心过滤后，以30%的乙醇溶液为空白对照，在最大吸收波长346 nm处测定吸光度，根据回归方程由吸光度求出对应的浓度，并依照式（1）计算提取量。

  （1）

式中：C为提取液吸光度对应的总黄酮浓度，mg/mL；

      V为提取液总体积，mL；

      W为称取紫藤叶粉末质量，g。

1。3。4 响应面分析法实验设计 

   为确定超声辅助提取紫藤叶中总黄酮的最佳工艺条件，本实验利用响应面分析法[14]优化超声辅助提取紫藤叶中总黄酮的最佳工艺参数。在单因素预实验的基础上，利用Design-Expert8。0。5b软件对超声频率、超声时间、料液比、乙醇浓度进行三因素三水平的响应面分析，三个指标R的取值范围都在由单因素实验得出的最优水平左右，指标R为紫藤叶中总黄酮的提取量，对提取工艺进行优化。

1。3。5 羟自由基清除率测定

    参照文献[15]的方法：取5支试管依次向其中各加入2。0 mmol/L的 FeSO4 2。0 mL、1。0 mmol/L 的H2O2 2。0 mL，振荡摇匀，再加入6。0 mmol/L的水杨酸3。0 mL，振荡摇匀，于37℃水浴加热15 min。加热完毕后于346 nm 波长处分别测定其吸光度 A0。再分别向5支试管中加入待试样品(紫藤叶的乙醇提取物，黄酮含量0。3702 mg/mL)0。2、0。4、0。6、0。8、1。0 mL，然后分别添加去离子纯水0。8 、0。6、0。4、0。2、0。0 mL，震荡摇匀后继续水浴加热15 min，加热完毕后再分别测其吸光度 Ax 。对照：用2。0 mL的去离子水取代 H2O2 溶液，重复上述过程，测吸光度 Ax0 ，样品对羟自由基的清除率计算公式（2）如下：来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

1。3。6 超氧阴离子自由基清除率测定

参照文献[15]的方法：取 6 支试管，依次编号为0、1、2、3、4、5，每管各加4。5 mL pH8。2的 50 mmol/L Tris-HC1的缓冲液，再分别加质量浓度为0。378 mg/mL的紫藤叶总黄酮提取液 0。0 、0 。2 、0 。4 、0。6 、0。8 、1 。0 mL，然后分别加去离子水 1。0 、0。8 、0 。6 、0。4 、0。2 、0。0 mL，震荡摇匀，在25℃水浴加热约20 min后加入0。3 mL在25℃预热过的10 mmol/L HCl溶液配制的3 mmol/L的邻苯三酚溶液启动反应。5min后滴加4滴10mol/L的盐酸终止反应。同时，再取6支试管，分别编号记为 0、1 、2、3、4、5 ，按照上述步骤依次加入Tris - HCl 得缓冲液、紫藤叶总黄酮提取液和去离子水，再分别加入10 mmol/L 盐酸0。3 mL，5 min 以后加4滴 10 mol/L 盐酸终止反应。在346nm 处用管0调零，并测管0的吸光度，记为 A对照；用管1调零，并测管 1的吸光度，记为 A加药1，再依次用管 2、3、4、5调零测管 2、3、4 、5 的吸光度，记为A加药2、A加药3、A加药4、A加药5 。各质量浓度总黄酮提取液对超氧阴离子的清除率计算公式1。3。7 LC-MS法检测黄酮的种类与结构